[發明專利]一種對免疫性肝損傷有保護作用的牡蠣多糖凝膠制劑

有效

• 申請號: 201310190768.5
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號: CN103263382A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 張莉;劉葉舟;田振華;盧學敏
• 申請（專利權）人: 山東大學(威海)
• 主分類號: A61K9/06
• 分類號: A61K9/06;A61K31/715;A61P1/16;A61K35/56
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域，具體涉及一種對免疫性肝損傷有保護作用的牡蠣多糖凝膠制劑，本發明產品對肝臟有保護作用及對肝功能有調理作用，本發明產品利于工業化生產。?

背景技術

免疫性肝損傷(包括自身免疫性肝炎)是由于患者肝臟的免疫耐受性減退，引起的一種不能自然痊愈的肝炎。關于自身免疫性肝炎的發病機制，最新觀點認為，機體在易感性基因的作用下，受環境因素、藥物或感染因子的誘導而發病，由于產生肝細胞膜自身靶抗原，機體免疫功能失調，以及肝臟本身免疫耐受性減退，導致肝損傷。卡介苗與脂多糖聯合誘導小鼠產生的免疫性肝損傷，其病理改變與肝細胞損傷機制和乙型病毒性肝炎相類似，此種造模方法所需時間短，方法簡便易行，損傷持續時間較久，適用于從免疫途徑篩選新藥，是目前研究肝炎發病與治療較為理想的模型之一。本實驗采用此種造模方法來探討牡蠣多糖凝膠制劑對小鼠免疫性肝損傷的保護作用。研究結果表明，小鼠尾靜脈注射卡介苗和脂多糖后，引起模型組小鼠血清轉氨酶的顯著升高，肝臟、脾臟和胸腺系數顯著改變，證明卡介苗加脂多糖復制的小鼠免疫性肝炎模型獲得成功。牡蠣多糖凝膠制劑的高、中劑量組與模型組比較能顯著降低血清中AST和ALT的含量。肝臟系數和脾臟系數顯著減小，胸腺系數顯著增大。尤其以牡蠣多糖高劑量組療效更為明顯，但是牡蠣多糖低劑量組療效不顯著，在試驗劑量范圍內顯示出隨著劑量的增加有療效增強作用。?

發明內容

1.本發明涉及一種對免疫性肝損傷有保護作用的牡蠣多糖凝膠制劑，其特征在于該制劑包括以下過程：?

步驟(一)：將牡蠣去殼、牡蠣肉洗凈、去雜質、瀝干、打漿，勻漿液加入菠蘿蛋白酶，加酶量為勻漿液的2-3％，用10％碳酸鈉調節pH為7.5-8.0，于60-65℃酶解3-4h；然后調節pH至8.5加入堿性蛋白酶，在55℃下酶解3-4h。將提取液置于90-100℃，10-20min，滅活菠蘿蛋白酶、堿性蛋白酶，冷卻，高速低溫離心(8500-10000r/min)30min，取上清液，得牡蠣粗多糖，凍干備用。?

步驟(二)：將步驟(一)中的凍干粉末用10-20倍水中充分攪拌溶解，靜置，離心去不?溶物，濾紙抽濾，濾液中緩慢加入2-3倍量95％乙醇，4℃下過夜，離心，上清液回收乙醇，沉淀用無水乙醇洗滌后真空干燥，得醇沉多糖。醇沉法的多糖含量為70-77.1％±3.4％，計算得率為牡蠣粗提物的33-38％；?

步驟(三)：取輔料0.4-0.6％瓊脂、0.2-0.5％卡拉膠、0.2-0.5％羧甲基纖維素，加水適量，溶脹20min，置90℃水浴中加熱20min，加入0.2％KCI、0.3％CaCI2、15-20％飴糖、5-10％蜂蜜及0.5-0.8％檸檬酸酸，攪拌使溶解，在等溫下，加入步驟(二)項的多糖0.1-0.3％，攪拌均勻，冷卻，分裝，即得；?

步驟(四)：將步驟(三)中的產品進行免疫性肝損傷保護作用試驗，該制劑對肝損傷有保護作用。?

2.根據本發明所述的一種對免疫性肝損傷有保護作用的牡蠣多糖凝膠制劑主要原料為太平洋牡蠣(Crassostrea?gigas)為牡蠣科、巨蠣屬。生鱗片，排列稀疏。殼形變化大，呈長圓形或長三角形，左殼凹陷較深，鱗片排列緊密，利用殼頂固著在巖礁石塊等堅硬的物體上生長，殼內面白色，內有寬大的韌帶槽。閉殼肌痕大，外套膜邊緣呈黑色。?

根據本發明，本發明中的“％”是重量百分比。?

具體實施方式

本發明所述的涉及一種對免疫性肝損傷有保護作用的牡蠣多糖凝膠制劑包括以下實施例，下面的實施例可進一步說明本發明，但不可以任何方式限制本發明。?

實施例1?

步驟(一)：挑選新鮮牡蠣10kg，將牡蠣去殼、牡蠣肉洗凈、去雜質、瀝干、打漿，勻漿液加入菠蘿蛋白酶，加酶量為勻漿液的3％，用10％碳酸鈉調節pH為8.0，于65℃酶解4h；然后調節pH至8.5加入堿性蛋白酶，在55℃下酶解3h。將提取液置于90℃，20min，滅活菠蘿蛋白酶、堿性蛋白酶，冷卻，高速低溫離心(10000r/min)30min，取上清液，得牡蠣粗多糖約，凍干約290g，備用；?

步驟(二)：將步驟(一)中的凍干粉末用10倍水中充分攪拌溶解，靜置，離心去不溶物，濾紙抽濾，濾液中緩慢加入2倍量95％乙醇，4℃下過夜，離心，上清液回收乙醇，沉淀用無水乙醇洗滌后真空干燥，得醇沉多糖。醇沉法的多糖含量為74.1％±2.7％，計算得率為牡蠣粗提物的35％；?