[發明專利]一種發形霞水母硫氧還蛋白及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201310189933.5
• 申請日: 2013-05-21
• 公開（公告）號: CN103232979A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 阮增良;柳國艷;張黎明;趙杰;溫小娟;尹慢慢;陸佳;劉丹
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;A61K38/44;A61K8/66;A61P39/06;A61Q19/08;A23L3/3571
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 趙青

1.一種發形霞水母硫氧還蛋白，其特征在于，所述的發形霞水母硫氧還蛋白具有如下(ⅰ)或(ⅱ)的蛋白質：

(ⅰ)具有SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(ⅱ)SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列經取代、缺失和/或添加一個或幾個氨基酸且同等功能的由（ⅰ）衍生的蛋白質。

2.根據權利要求1所述的一種發形霞水母硫氧還蛋白，其特征在于：所述的發形霞水母硫氧還蛋白具有如SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列，該蛋白不含信號肽，為非分泌蛋白，定位于細胞質，分子量為11.5kDa，等電點為5.1。

3.一種如權利要求1所述的發形霞水母硫氧還蛋白的編碼基因，其特征在于，該編碼基因為如下(ⅰ)或(ⅱ)的DNA分子：

(ⅰ)具有SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列；

(ⅱ)與SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列同源性在80%以上的核苷酸序列。

4.根據權利要求3所述的一種發形霞水母硫氧還蛋白的編碼基因，其特征在于：所述的發形霞水母硫氧還蛋白的編碼基因，該核苷酸序列全長479bp，包含一個315bp的開放閱讀框。

5.一種如權利要求2所述的發形霞水母硫氧還蛋白的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

（A）構建發形霞水母觸手組織cDNA文庫；

（B）對上述發形霞水母觸手組織cDNA文庫重組克隆的序列進行測定和分析，獲得一個編碼硫氧還蛋白的核苷酸序列；

（C）構建發形霞水母硫氧還蛋白的表達質粒，重組工程菌；

（D）發形霞水母硫氧還蛋白的表達；

（E）重組發形霞水母硫氧還蛋白的純化。

6.根據權利要求5所述的發形霞水母硫氧還蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟（A）中的發形霞水母觸手組織cDNA文庫通過如下方法構建：

a）抽提發形霞水母觸手組織總RNA；

b）分離mRNA，合成發形霞水母觸手組織cDNA；

c）將上述cDNA插入pUC19質粒載體，再轉化至大腸桿菌DH5α中，涂布于LB培養基平板進行藍白斑篩選，即構建成發形霞水母觸手組織cDNA文庫。

7.根據權利要求5所述的發形霞水母硫氧還蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟（C）中的構建發形霞水母硫氧還蛋白的表達質粒，重組工程菌，具體步驟為：

a）設計并合成PCR引物如下：

上游引物如SEQ?ID?NO:3所示，

下游引物如SEQ?ID?NO:4所示，

PCR反應條件為：95℃保溫5min；95℃保溫30sec，55.5℃保溫30sec，68℃保溫1min，30個循環；68℃保溫5min；

b）酶切回收后的PCR產物及pET24a原核表達質粒；

c）利用兩個酶切位點將編碼序列連接到pET24a載體上，構建重組表達質粒，然后轉化到大腸桿菌BL21獲得重組工程菌。

8.根據權利要求5所述的發形霞水母硫氧還蛋白的制備方法，其特征在于：所述步驟（D）中的發形霞水母硫氧還蛋白的表達條件為：25℃、1mM?IPTG、150rpm/min下誘導8小時。

9.一種如權利要求1或2所述的發形霞水母硫氧還蛋白在制備抗氧化藥物、抗輻射藥物、皮膚防護劑、食品防腐劑或抗衰老藥物中的應用。

10.一種如權利要求3所述的發形霞水母硫氧還蛋白的編碼基因在制備抗氧化藥物、抗輻射藥物、皮膚防護劑、食品防腐劑或抗衰老藥物中的應用。