[發(fā)明專(zhuān)利]一種酸奶中乳酸含量的快速測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310189665.7
• 申請(qǐng)日: 2013-05-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103293211A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 龍梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 赤峰學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/416
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/416;G01N27/30
• 代理公司: 赤峰市專(zhuān)利事務(wù)所 15103
• 代理人: 劉峰

技術(shù)領(lǐng)域??本發(fā)明涉及一種乳酸含量的快速測(cè)定方法，特別涉及一種酸奶中乳酸含量的快速測(cè)定方法，屬于分析化學(xué)分析檢測(cè)領(lǐng)域。

背景技術(shù)??酸奶是以滅菌乳接種乳酸菌發(fā)酵而成的牛奶制品，其中含有豐富的蛋白質(zhì)和鈣。在酸奶中，通過(guò)活性乳酸菌發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)得到的天然乳酸是其固有成分，它不僅是主要的酸味劑，更具有良好的抗微生物作用。

目前，食品中乳酸含量的分析測(cè)定一直受到國(guó)內(nèi)外研究者的廣泛關(guān)注。常見(jiàn)的測(cè)定方法有早期的酸堿滴定法和EDTA滴定法，近期興起的高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、酶電極法、毛細(xì)管電泳法(CE)等等。每種方法都有其自身的適應(yīng)范圍和準(zhǔn)確度，都有各自的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。基于酶電極建立的電化學(xué)測(cè)定法因?yàn)榫哂懈哽`敏度，高選擇性，操作簡(jiǎn)便，成本低廉等一系列優(yōu)點(diǎn)而在食品分析領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

利用酶電極法測(cè)定酸奶中乳酸雖然具有快速簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，但是考慮到酸奶中除了牛奶和發(fā)酵劑這兩大主要成分以外，還有許多配料，如穩(wěn)定劑、甜味劑及其它各種食品添加劑等，這樣復(fù)雜的基質(zhì)中存在許多結(jié)構(gòu)類(lèi)似的有機(jī)酸及其它化學(xué)干擾物，直接測(cè)定十分困難。微透析取樣技術(shù)的引入既可以避免復(fù)雜基質(zhì)對(duì)于測(cè)定的干擾，也可以與酶電極方法連用實(shí)現(xiàn)快速、實(shí)時(shí)、在線(xiàn)測(cè)定乳酸的含量。

微透析技術(shù)(microdialysis，MD)是利用“物質(zhì)會(huì)沿濃度梯度進(jìn)行擴(kuò)散”和“半透膜對(duì)小分子化合物具有通透性”的原理為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的一種新型的采樣技術(shù)，它將灌流取樣和透析技術(shù)相結(jié)合，具有實(shí)時(shí)在線(xiàn)、動(dòng)態(tài)觀察、定量分析、采樣量小等特點(diǎn)。例如可以在線(xiàn)對(duì)鼠腦內(nèi)的乳酸、抗壞血酸等物質(zhì)實(shí)施動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。而植物微透析的相關(guān)報(bào)道非常少。由于透析樣品只含游離態(tài)小分子化合物，不含蛋白質(zhì)、酶等大分子物質(zhì)，樣品穩(wěn)定性高，不易酶解，因此使得樣品無(wú)需前處理即可直接檢測(cè)，避免了樣品損失和誤差。同時(shí)還避免了復(fù)雜的樣品基質(zhì)對(duì)生物酶活性的影響。

發(fā)明內(nèi)容??本發(fā)明的目的在于克服了復(fù)雜的樣品基質(zhì)對(duì)生物酶活性的影響，引入微透析取樣技術(shù)，并與電化學(xué)方法相結(jié)合，提供了一種實(shí)時(shí)、在線(xiàn)取樣，連續(xù)快速對(duì)酸奶中的乳酸含量進(jìn)行測(cè)定的方法。

本發(fā)明目的主要是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：?

一種酸奶中乳酸含量的快速測(cè)定方法，包括微透析取樣方式，LDH-MG-SWNT修飾的玻碳電極的制備和電化學(xué)測(cè)定條件；

所述的微透析取樣方式如下：稱(chēng)取酸奶后加入人工腦脊液稀釋?zhuān)崮毯腿斯つX脊液的比為1:4~6（mg/?mL）,將微透析探針插入稀釋后的酸奶中，灌流平衡10?min?-15?min后，將酸奶透析液接入薄層電化學(xué)流動(dòng)池中，測(cè)定該酸奶透析液中乳酸的含量，人工腦脊液由微量注射器經(jīng)微透析泵泵進(jìn)微透析探針，流速為1μL?/min?-2?μL?/min；

所述的LDH-MG-SWNT修飾的玻碳電極如下：將2?mg?-4?mg?SWNT和3-7?mg?MG?同時(shí)加入3?mL?-8?mL蒸餾水中，超聲2?h，得到分散均勻的MG-SWNT懸濁液，取5μL?-10?μL懸濁液滴涂到玻碳電極的表面，在室溫下干燥，然后將20?mg?/mL?LDH溶液4μL?-8?μL、1％BSA溶液2μL?-5?μL和1％戊二醛溶液3μL?-7μL混合滴涂在MG-SWNT玻碳電極上，干燥5min-10min后即得到乳酸脫氫酶修飾的碳納米管玻碳工作電極，將電極固定在薄層電化學(xué)流動(dòng)池中，用于檢測(cè)乳酸，乳酸脫氫酶修飾的碳納米管玻碳電極在不使用時(shí)放置在冰箱中4℃下保存；

所述的電化學(xué)測(cè)定條件是：電化學(xué)實(shí)驗(yàn)在多通道電化學(xué)工作站（CHI1030）上進(jìn)行，電化學(xué)測(cè)定使用三電極體系，薄層電化學(xué)流動(dòng)池是由乳酸脫氫酶修飾的碳納米管玻碳電極作為工作電極，Ag/AgCl(KCl-sat)作為參比電極，鉑絲作為對(duì)電極，組成薄層的膜（Gasket）厚為40μm?-50?μm，工作電極電壓為0V，輔酶NAD⁺流速為3μL?/min?-5?μL?/min。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和效果是：本發(fā)明建立了微透析取樣，LDH-MG-SWNT?修飾的玻碳電極在線(xiàn)、快速電化學(xué)檢測(cè)酸奶中乳酸含量的新方法。該分析方法無(wú)需復(fù)雜的樣品前處理過(guò)程，且具有良好的選擇性、穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度高，具有廣泛的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明??圖1是本發(fā)明中LDH-MG-SWNT修飾的玻碳電極在薄層電化學(xué)流動(dòng)池中連續(xù)、在線(xiàn)測(cè)量酸奶中乳酸含量的分析體系示意圖（電位0?V，輔酶NAD^+?濃度為10?mM，人工腦脊液pH?=?7.4，探針平衡10?min）。