[發明專利]一株圓酵母菌株及其通過搖瓶和5L發酵罐發酵生產赤蘚糖醇的方法

無效

• 申請號: 201310189342.8
• 申請日: 2013-05-21
• 公開（公告）號: CN103224891A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 張六六;吳燕;陸茂林;唐寶英;劉佳
• 申請（專利權）人: 江蘇省微生物研究所有限責任公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P7/18;C12R1/645
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 曹祖良

1.一株圓酵母（Torula.sp）B84512菌株，保藏編號為CGMCC7582，保藏日期為2013年5月12日，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

2.權利要求1所述以圓酵母菌株搖瓶發酵法生產赤蘚糖醇的方法，其特征是步驟為：

（1）細胞液體培養物的制備：挑取YPD固體培養基上的圓酵母（Torula.sp）B84512菌株一環，接種在裝有50mL種子培養基的500?mL錐形瓶中，在25-35℃下，置于搖床上以150-200?r/min的轉速培養30-48h至對數期，即制得圓酵母（Torula.sp）B84512菌株的細胞液體培養物；

YPD固體培養基如下：酵母粉10?g/L；蛋白胨20?g/L；葡萄糖20?g/L；pH?7.0，121℃高壓蒸汽滅菌20min；固體YPD培養基在液體培養基的基礎上加入20?g/L瓊脂粉；

種子培養基：葡萄糖200?g/L，酵母粉10?g/L，尿素1?g/L，CuSO₄??5H₂O?0.01?g/L，MnSO₄??H₂O?0.?01?g/L，PH自然，其余為純水，115℃高壓蒸汽滅菌15min；

（2）準備發酵培養基，培養基成分按重量百分比計如下：葡萄糖20%-30%，酵母粉0.5%-1%，CuSO₄·5H₂O?0.0005%-0.001%，MnSO4?H₂O?0.0005%-0.001%，其余為純水，pH自然，110-120℃、0.1-0.2MPa蒸汽滅菌10-20min，待用；

（3）搖瓶發酵：將步驟（1）制備的圓酵母（Torula.sp）B84512菌株的細胞液體培養物以重量比，即細胞液體培養物的重量占發酵培養基4%-8%的接種量接種在裝有已滅菌的25-50mL發酵培養基的500?mL錐形瓶中，在28℃-30℃條件下，置于搖床上以150-200?r/min的轉速發酵培養160-180?h，即得赤蘚糖醇的發酵液。

3.權利要求1所述以圓酵母菌株5L發酵罐發酵生產赤蘚糖醇的方法，其特征是：

（1）細胞液體培養物的制備：挑取YPD固體培養基上的圓酵母（Torula.sp）B84512菌株一環，接種在裝有50mL種子培養基的500?mL錐形瓶中，在25-35℃下，置于搖床上以150-200?r/min的轉速培養30-48h至對數期，即制得圓酵母（Torula.sp）B84512菌株的細胞液體培養物；

YPD固體培養基如下：酵母粉10?g/L；蛋白胨20?g/L；葡萄糖20?g/L；pH?7.0，121℃高壓蒸汽滅菌20min；固體YPD培養基在液體培養基的基礎上加入20?g/L瓊脂粉；

（2）準備發酵培養基，培養基成分按重量百分比計如下：葡萄糖20%-30%，酵母粉0.5%-1%，CuSO₄·5H₂O?0.0005%-0.001%，MnSO4?H₂O?0.0005%-0.001%，其余為純水，pH自然，110-120℃、0.1-0.2MPa蒸汽滅菌10-20min，待用；

（3）發酵條件：將步驟（1）制備的圓酵母（Torula.sp）B84512菌株的細胞液體培養物以重量比，即細胞液體培養物的重量占發酵培養基4%-8%的接種量接種在裝有已滅菌的2-3L發酵培養基的5L發酵罐中，在溫度為28-30℃，轉速為300-600r/min，通氣量為0.5-1vvm的條件下發酵培養60-84h，即得赤蘚糖醇的發酵液。

4.如權利要求3所述以圓酵母菌株5L發酵罐發酵生產赤蘚糖醇的方法，其特征是：通過補料發酵提高赤蘚糖醇的發酵液的含量；

發酵條件如下：將圓酵母（Torula.sp）B84512菌株的細胞液體培養物以重量比，即細胞液體培養物的重量占發酵培養基4%-8%的接種量接種在裝有已滅菌的2-2.4L發酵培養基的5L發酵罐中，在28-30℃條件下，轉速為300-600r/min，通氣量為0.5-1vvm，發酵培養；待葡萄糖濃度降至150-200g/L時補加600-800mL?質量濃度為80%葡萄糖，繼續發酵培養230-250?h，即得赤蘚糖醇的發酵液。