[發明專利]與胎兒先天性心臟病相關的母體血清/血漿miRNA標志物mir-19b及其應用

有效

• 申請號: 201310188772.8
• 申請日: 2013-05-16
• 公開（公告）號: CN103290013A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 余章斌;韓樹萍;朱莎莎;曹荔;錢玲梅;郭錫熔;孔麗萍;朱春;朱金改;潘亞
• 申請（專利權）人: 南京市婦幼保健院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N1/11;C12Q1/68
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

發明領域

本發明屬于醫學領域和基因工程，涉及與胎兒先天性心臟病相關的母體血清/血漿miRNA標志物mir-19b及其應用。

背景技術

先天性心臟病（congenital?heart?disease，CHD）是指心臟和胸內大血管的結構畸形及其可能導致的功能性異常，它是胎兒及新生兒缺陷中最常見的一種。每年約有5‰-8‰的新生兒患有CHD，這一發生率是染色體異常的6倍，神經管缺陷的4倍。CHD患兒中大約有50%病情嚴重，在出生后需要接受數次的外科治療，而且很多時候即使在有外科干預的條件下，死于CHD的新生兒仍占新生兒總死亡率的40%，其中20%死于出生后第一個月。因此，早期診斷、早起干預、及時合理治療是減少CHD發病率和死亡率的關鍵，是亟待解決的重大科學問題。

目前早期診斷CHD的方式主要是胎兒超聲心動圖。據統計，該方法診斷CHD的靈敏性和特異性分別可以達到85%（95%CI，78-90%），99%（95%CI,98-100%）。盡管這一數據表明心超診斷CHD的水平很高，但該方法仍受到多方面的的限制。被檢查者的肥胖程度、超聲設備的分辨率、檢查者的技術及經驗等都可能會影響到檢查的最終結果。因此，我們亟需發現更加明確而有效的生物標記物，對CHD做出輔助早期診斷，這將有助于早期干預，早起治療，減少CHD的發生率，提高患兒的生存率。

miRNA是近年來分子生物學研究領域的一個熱點，它是一類生物體內自然生成的小分子非編碼RNA，其成熟狀態長約19-23個核苷酸，具有高度保守性。miRNA通過參與調節其特異靶基因的表達，來控制蛋白的產生，調節發育時序，從而參與細胞的增殖，分化，代謝與凋亡，在機體生長發育及疾病發生過程中發揮重要作用。自從發現lin-4與let-7參與調控線蟲時序發育以來，越來越多的miRNAs被人們發現，miRNAs與疾病的關系也已經成為研究的熱點與重點。近年來，已經發現miRNAs通過負反饋基因的表達與乳腺癌，肺癌，胃癌，糖尿病，心臟病等的發病密切相關。

生物標記物是指能將機體的生理和病理狀態區分開來的生物分子。篩選到可用于CHD早期發現、早期診斷的生物標志物可大大提高CHD患兒的臨床治療效果。最新數據顯示心臟組織有其特異性的miRNAs，即這些miRNAs的表達水平與相同組織的正常細胞存在顯著差異，而特征性的miRNAs異常表達可望成為用于CHD早期診斷的生物標志物，顯示了美好的臨床應用前景。

近年來研究證實，miRNAs能穩定存在于血清/血漿中，且含量豐富、易于定量檢測，具有顯著的疾病特異性。這些特點都使得運用定性和定量miRNA分子技術，將血清miRNA作為生物標志物比傳統的標記方法將更加有效，為生物標記技術及疾病診斷開拓了新境界。

目前有關血清/血漿miRNA的來源還沒有定論，有些研究者認為腫瘤患者血清/血漿中的miRNA來源于靶組織，但其表達變化與靶組織的一致性還有待探討；也有研究者認為miRNA可以被選擇性富集到“microparticles(MPs)”或“exosomes”中，由細胞以“microvesicles微泡”脫落的方式主動向外分泌。具有共識的意見是，組織/細胞來源的miRNA表達譜與血清/血漿來源的miRNA表達譜是兩個不同的體系，二者的表達譜并不完全一致，也沒有文獻報導二者存在關聯性。不同來源的miRNA表達譜中特定miRNA的表達不一定在相同時段發揮相同的調控作用，組織/細胞中表達的miRNA不一定在血清/血漿中具有同樣的表達量。鑒于目前還沒有用于CHD輔助早期診斷的較為穩定的生物標志物的現狀，將母血清/血漿miRNA作為篩選CHD的生物標志物，并研制相應的輔助早期診斷試劑盒，具有廣泛的科研價值和臨床應用的前景。

發明內容

本發明的目的是針對上述技術問題，提出一種與CHD相關的母血清/血漿miRNA標志物。

本發明另一個目的是提供上述miRNA標志物的引物或探針。

本發明還有一個目的是提供上述miRNA標志物及其引物或探針在制備CHD輔助早期診斷中的應用。

本發明再一個目的是提供CHD輔助早期診斷試劑盒。