[發明專利]一種孔雀石綠免疫親和柱及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201310188359.1
• 申請日: 2013-05-21
• 公開（公告）號: CN104174185A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 柳家鵬;張彥明;魏光;陸成慧
• 申請（專利權）人: 北京美正生物科技有限公司
• 主分類號: B01D15/38
• 分類號: B01D15/38;B01J20/281;G01N1/34
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種孔雀石綠的免疫親和柱，其特征在于包含有載體、蛋白G和抗孔雀石綠抗體。

2.根據權利要求1中所述的免疫親和柱，其特征在于蛋白G通過化學鍵偶聯在載體上，孔雀石綠抗體與蛋白G結合后用交聯劑交聯。

3.根據權利要求1中所述的免疫親和柱，其特征在于蛋白G是基因重組表達的蛋白G。

4.根據權利要求2中所述的免疫親和柱，其特征在于所述的蛋白G包括按照GenBank?CAA27638.1序列表達的蛋白G，以及進過序列優化后表達的蛋白G。

5.根據權利要求3中所述的免疫親和柱，其特征在于所述的序列優化的蛋白G，包括針對大腸桿菌表達進行的蛋白G密碼子進行優化、對蛋白G進行抗體結合區域進行序列改變以增加親和力以及增加蛋白G基因序列中抗體結合區域數量以提高抗體親和能力。

6.根據權利要求1中所述的免疫親和柱，其特征在于所述的載體是瓊脂糖凝膠。

7.根據權利要求6中所述的免疫親和柱，其特征在于所述的瓊脂糖凝膠包含但不限于溴化氰活化的瓊脂糖凝膠、交聯的瓊脂糖凝膠、聚丙烯酸瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺瓊脂糖凝膠、葡聚糖凝膠以及纖維素。

8.根據權利要求6中所述的免疫親和柱，其特征在于所述的抗孔雀石綠抗體包括單克隆IgG抗體和多克隆抗體。

9.一種純化孔雀石綠的免疫親和柱制備方法，其特征在于

1)瓊脂糖sepharose4B，加入0.8M的NaOH，30％的環氧氯丙烷，2mg/ml的硼氫化鈉NaBH4，，在25℃下搖床反應8小時進行活化。或者購買溴化氰活化的sepharose4B。

2)每克活化的sepharose4B加入30-200nmol的蛋白G，在0.1M?NaHCO3，0.5M?NaCl?PH8.8的緩沖液中，室溫偶聯2小時。或者4℃偶聯過夜。

3)偶聯產物用1M?Tris.HCl?PH8.0室溫反應2小時。

4)偶連好的sepharose-蛋白G，用20mM?PH7.4的PBS洗滌。

5)將孔雀石綠抗體溶解在同樣的20mM?PH7.4的PBS中，每克蛋白G-sepharose加入200nmol-1.2umol抗體。室溫反應30分鐘。

6)將孔雀石綠抗體-蛋白G-sepharose載體用20mM?PBS?PH7.4洗滌，然后加入終濃度0.2M的三乙醇胺和20mM的二甲基庚二酸酯(DMP)，PH8.3.室溫反應1小時。

7)用20mM?PH7.4的乙醇胺終止反應，用含有0.01％硫柳汞的10mMPBS?PH7.4洗滌孔雀石綠抗體-蛋白G-sepharose載體。裝柱，放于4℃保存。

10.根據權利要求1所述的免疫親和柱檢測孔雀石綠的用途。

11.根據權利要求10所述的用途，其特征在于：包含但不限于糧食、水產、食品中孔雀石綠的分離純化。