[發(fā)明專利]鑒別花臉香蘑原生質(zhì)體單核體交配型的方法及其專用引物對IS-857c

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310188032.4
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN103224991A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發(fā)明（設計）人: 許峰;劉宇;耿小麗;王守現(xiàn);趙爽;李登進;王鵬;王蘭青
• 申請（專利權）人: 北京市農(nóng)林科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產(chǎn)權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.鑒別或輔助鑒別花臉香蘑原生質(zhì)體單核體交配型的方法，包括如下步驟：分別以待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的基因組DNA為模板，用由SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的兩條單鏈DNA組成的PCR引物對進行PCR擴增，檢測所得到的PCR產(chǎn)物的大小，根據(jù)PCR擴增產(chǎn)物的大小按照下述方法確定所述待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的交配型：

如果所述待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的PCR產(chǎn)物均含有500bp-800bp的DNA片段，所述待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的交配型相同或候選為交配型相同，如果所述待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的PCR產(chǎn)物均不含有500bp-800bp的DNA片段，所述待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的交配型相同或候選為交配型相同；如果所述待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體中的一株待鑒別的花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的PCR產(chǎn)物含有500bp-800bp的DNA片段，另一株待鑒別的花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的PCR產(chǎn)物不含有500bp-800bp的DNA片段，所述待鑒別的兩株花臉香蘑原生質(zhì)體單核體的交配型不同或候選為交配型不同。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述500bp-800bp的DNA片段為765bp的DNA片段。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述PCR擴增采用的引物退火條件為57℃退火30s。

4.根據(jù)權利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：所述PCR擴增中采用的PCR反應溫度程序：94℃預變性5min；94℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸40s，30個循環(huán)；72℃延伸7min。

5.權利要求1-4中任一所述的方法在花臉香蘑育種中的應用。

6.鑒別或輔助鑒別花臉香蘑原生質(zhì)體單核體交配型的PCR引物對，其特征在于：所述引物對的名稱為IS-857c，由SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的兩條單鏈DNA組成。

7.含有權利要求6所述的PCR引物對的鑒別或輔助鑒別花臉香蘑原生質(zhì)體單核體交配型的試劑。

8.含有權利要求6所述的PCR引物對的鑒別或輔助鑒別花臉香蘑原生質(zhì)體單核體交配型的試劑盒。

9.權利要求6所述的PCR引物對、權利要求7所述的試劑或權利要求8所述的試劑盒在鑒別或輔助鑒別花臉香蘑原生質(zhì)體單核體交配型中的應用。

10.權利要求6所述的PCR引物對、權利要求7所述的試劑或權利要求8所述的試劑盒在花臉香蘑育種中的應用。