[發明專利]一種銅綠微囊藻的快速計數方法

無效

• 申請號: 201310186980.4
• 申請日: 2013-05-18
• 公開（公告）號: CN103276045A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 蘇文;孔繁翔;趙旭輝
• 申請（專利權）人: 中國科學院南京地理與湖泊研究所
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;G01N21/31;C12R1/01
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 韓朝暉

1.一種銅綠微囊藻的快速計數方法，其特征在于，將含銅綠微囊藻的待測樣品稀釋一定倍數后，采用酶標儀測定藻液在波長680nm處的吸光度，根據建立的吸光度和細胞密度之間的校正曲線或回歸方程，計算得到待測樣品中的銅綠微囊藻的數量。

2.根據權利要求1所述的銅綠微囊藻的快速計數方法，其特征在于，所述的方法包括以下步驟：

1）校正曲線或回歸方程的建立

配制一組含銅綠微囊藻的不同濃度的藻液，通過酶標儀測定不同濃度藻液在波長680nm處的吸光度A_i，同時用顯微鏡對每個濃度的藻液中銅綠微囊藻的細胞精確計數，得到細胞密度C_i，即單位體積藻液中銅綠微囊藻的細胞數；測定空白樣品在波長680nm處的吸光度A₀，根據吸光度A_i-A₀和細胞密度C_i繪制校正曲線，或線性回歸計算得到線性回歸方程；

2）銅綠微囊藻計數

將含銅綠微囊藻的待測樣品稀釋一定倍數，使稀釋后的藻液其細胞密度在校正曲線或回歸方程的線性范圍內，在與步驟1）相同的條件下，采用酶標儀測定稀釋后藻液在波長680nm處的吸光度，根據校正曲線或回歸方程計算得到待測樣品中的銅綠微囊藻的個數。

3.根據權利要求2所述的銅綠微囊藻的快速計數方法，其特征在于，所述的步驟1）校正曲線或回歸方程的建立按如下方法進行：

取1ml滅菌培養基培養的對數期的銅綠微囊藻，分別稀釋2、5、8、10、20、50、100、1000倍，空白組加入滅菌的培養基，將稀釋后不同濃度的藻液和空白組加入微孔板中，每組5～10個平行樣；通過酶標儀測定每個濃度藻液在波長680nm處的吸光度，取平均值得到該濃度藻液的吸光度A_i，空白樣品的吸光度A₀；同時用顯微鏡對每個濃度的細胞精確計數，每個樣品重復5-8次，取平均值得到細胞密度C_i，在吸光度A_i-A₀和細胞密度C_i之間建立校正曲線或回歸方程。

4.根據權利要求3所述的銅綠微囊藻的快速計數方法，其特征在于，所述的銅綠微囊藻的培養基為滅菌的BG-11。

5.根據權利要求2所述的銅綠微囊藻的快速計數方法，其特征在于，所述的步驟2）中含銅綠微囊藻的待測樣品稀釋后的藻液取8-10個平行樣，加入微孔板中，采用酶標儀測定波長680nm處的吸光度，取平均值。

6.根據權利要求3或5所述的銅綠微囊藻的快速計數方法，其特征在于，所用微孔板為96孔板，每孔300μl樣品。