[發明專利]一種那非類藥物的檢測方法及檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201310186616.8
• 申請日: 2013-05-17
• 公開（公告）號: CN103293150A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 卞禹卜;陶艷偉;衛喜燕;楊曉慧;李林
• 申請（專利權）人: 無錫中德伯爾生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術領域

本發明涉及一種那非類藥物的檢測方法及檢測試劑盒。

背景技術

磷酸二酯酶是NO-cGMP通路的負調節因子，它通過催化cGMP的分解而調低一氧化氮的作用，一般認為體內的一氧化氮是一個調節血管平滑肌擴張的因子，因而磷酸二酯酶作用的結果是促進血管平滑肌的收縮。那非類藥物可以高選擇性的抑制人體內5型磷酸二酯酶（PDE5）活性，PDE5在陰莖海綿體內表達水平極高，而在人體其他組織和器官中則表達較低。服用那非類藥物后，陰莖海綿體血管平滑肌在藥物的作用下舒張，血液流量增加，海綿體充血，陰莖勃起，從而產生對陰莖勃起功能障礙的治療作用。

那非類藥物主要的不良反應來自于它對人體其他部位磷酸二酯酶的抑制作用。常見的不良反應有：頭暈、鼻塞、消化不良以及一過性的視覺異常，這種異?？赡鼙憩F為藍/綠顏色辨別異常、光感增強或視物模糊。以上這些不良反應大多是由于相關的平滑肌松弛造成的。另外那非類藥物比較嚴重的不良反應還包括：臥位血壓下降和心輸出量下降，此外臨床研究顯示服用那非類藥物后進行性行為，發生心臟異常的幾率增加，這包括心絞痛、頭暈、惡心等癥狀，并有可能造成心源性猝死。

近年來，在補腎壯陽類中藥制劑和保健品中非法添加那非類藥物的情況甚為嚴重。查處在補腎壯陽類藥品和保健品中擅自添加那非類藥物的違法行為，是一項長期的任務。它涉及范圍廣，需要進行大量的檢驗，在廣大的農村地區和經濟欠發達的中小城市開展這項檢驗活動有較大難度。

現有的檢驗藥品和保健品中摻雜那非類藥物的方法有：

1、薄層色譜法

樣品中的待測成分用混合溶劑[乙醇-正己烷-氨水（70:30:1）]提取，所得的供試品溶液和對照品溶液點在同一塊薄層色譜板上，用展開劑展開，晾干后，在紫外燈下檢示。若那非類藥物對照品斑點相應位置未見色譜斑點（低于檢測靈敏度），可認為產品中為摻有那非類藥物，若有明顯斑點，應懷疑可能摻有那非類藥物。

薄層色譜法的優點是不需要使用昂貴的分析儀器。該方法的缺點是：（1）色譜分辨率較低，保健品成分復雜，干擾因素多，易將某些共存成分誤判為那非類藥物，某些共存成分如果量較大且色譜遷移值與那非類藥物接近則會干擾目標成分的檢出。（2）色譜展開和晾干的時間長，不能滿足快速測定的要求。（3）要求實驗人員有較好的經驗。（4）需要有固定的實驗場所，不適合作流動性大的現場檢測。

2、高效液相色譜法

高效液相色譜法是常用的現代分析方法。在相同的色譜條件下，不同的物質有不同的色譜保留時間。在相同是色譜條件下那非類溶液對照樣品溶液和樣品提取所得的供試品溶液分別進樣，根據色譜保留時間可檢測那非類藥物的含量。

高效液相色譜法的優點是色譜分離效率高，靈敏度高。其缺點是：（1）儀器價格昂貴，樣品前處理時間長，大多數針對單一產品，使用的流動相多為一定比例的甲醇和鹽溶液，試驗后需要用大量水沖洗色譜柱，色譜柱易受污染，分析成本高；（2）當共存成分的色譜保留時間與西地那非的色譜保留時間接近時容易作出錯誤的判斷；（3）儀器對使用環境要求高，需要固定擺放，不適合作流動性大的現場檢測。

3、高效液相色譜-質譜聯用法

采用液質聯用技術，可以對高效液相色譜分離出的那非類藥物峰進一步作質譜分析鑒定。適用于成分復雜、背景干擾嚴重的樣品分析，這種分析方法可提高檢驗結果的可靠性。

缺點：分析成本高，操作復雜；儀器對使用環境要求更高，需要固定擺放，不適合作流動性大的現場檢測，不易推廣使用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種克服現有技術存在的缺點，分析成本低、不需要使用貴重分析儀器、專屬性強、靈敏度高，適用于現場檢驗藥品、保健品是否摻入那非類藥物的快速檢測方法。

本發明的那非類藥物的快速檢測方法，依次包括如下步驟：

（1）取樣品加入酸性溶液提?。?

（2）加入萃取劑萃取，萃取液中加入緩沖液；

（3）加入溴甲酚綠溶液，觀察溶液是否顯示黃色。

那非類藥物有三個可接受質子的氮原子，在酸性溶液中，接受三個質子后生成帶三個正電荷、呈游離態的陽離子（以R³⁺表示）。酸性溶液的存在可增強那非類藥物生成游離態陽離子（R³⁺）的能力，使溶液中游離態陽離子（R³⁺）有較高的濃度。

酸性溶液為稀鹽酸、稀硫酸或稀磷酸中的一種，濃度為0.01~0.1mol/L，或前述幾種酸性溶液的混合溶液，優選為0.05mol/L稀鹽酸。