[發明專利]一種葡萄果實糖分HPLC-ELSD測定方法

無效

• 申請號: 201310185129.X
• 申請日: 2013-05-17
• 公開（公告）號: CN103267821A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 鄧群仙;李夢鴿;董禮;呂秀蘭;廖明安;劉健;程雪麗;李康寧
• 申請（專利權）人: 四川農業大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/14
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 龔燮英

技術領域

本發明屬于食品糖分檢測技術領域，特別涉及一種葡萄果實糖分HPLC-ELSD測定方法。

背景技術

葡萄是世界上最重要的水果之一。葡萄果實皮薄多汁，酸甜味美，營養豐富。成熟的漿果中含糖量可達10%～30%，葡萄果實的糖分以葡萄糖、果糖為主，此外還含有少量的蔗糖，容易被人體直接吸收；葡萄果實中的多種果酸有助于消化；葡萄果實中含有多種對人體有益的礦物質、維生素、氨基酸、卵磷脂以及美容養顏的花青苷、類黃酮、白藜蘆醇等成分。葡萄用途廣泛，可用于鮮食、制酒、制汁和制干。葡萄果實糖分含量是影響漿果品質的重要指標。糖分組成及其含量高低不僅直接影響成熟漿果的營養品質和風味；而且作為花色苷合成前體物質，果實糖分組成及其含量會影響葡萄漿果的著色，從而影響鮮食葡萄的外觀品質和釀酒葡萄的加工品質。因此，葡萄果實生長發育過程中以及成熟采收時，準確、快速測定葡萄的糖分非常重要。

目前，常用于分離和測定糖組分的方法有氣相色譜（GC）法和高效液相色譜（HPLC）法等。但GC法需將試樣在柱前衍生成可氣化的揮發性成分，操作繁瑣、耗時長。H?PLC法較氣相色譜法簡單方便，無需衍生化，并且測定單糖、低聚糖效果較好。HPLC法檢測糖類的檢測器有示差檢測器（RID）、紫外檢測器、熒光檢測器、電化學檢測器和蒸發光散射檢測器（ELSD）等。RID是HPLC法檢測糖類的常用檢測器，基于連續測定色譜柱流出物折射率的變化；它對溫度極其敏感使得基線很不穩定，與梯度洗脫不相容，且檢測靈敏度很低。ELSD是基于色譜柱流出物霧化后的不揮發性溶質顆粒的光散射電信號對樣品進行定性定量，其響應不依賴于樣品的光學特性，不要求樣品帶有發色團或熒光基團，因而具有穩定性好、靈敏度高、無溶劑峰干擾等優點。傳統高效液相色譜法測定糖分時，常用色譜柱中的氨基柱，對乙腈純度要求高，穩定性差，固定相易流失，壽命短，價格昂貴。ODS柱（十八烷基硅烷鍵合硅膠填料，也稱C18柱）的目標峰分離不完全，效果不理想。Waters高效糖柱、Zorbaxa高效糖柱等均為等度洗脫，一些糖的分離不如梯度洗脫的好，如果梯度洗脫則可能會造成其柱床的化學降解而影響柱效。其它離子型糖柱則必須在高柱溫下才能使一些糖成分達到分離。Prevail糖柱作為專用糖柱，為聚苯乙烯-二乙烯基苯鍵合的氨基糖柱，不存在困擾其它糖柱如氨基柱、高效糖柱、ODS柱以及其他離子型糖柱的問題，沒有化學降解現象，分離效果良好，且在室溫及梯度洗脫的情況下亦很穩定。

發明內容

本發明的目的是提供一種葡萄果實糖分的檢測方法，該方法是利用HPLC-ELSD測定方法檢測葡萄果實糖分的。

一種葡萄果實糖分HPLC-ELSD測定方法，包括如下步驟：

1）取樣

葡萄謝花后20-25d起，在植株的東、西、南、北四個方向及上、中、下三個位置，采取中等大小、無病蟲害的果實，每隔7-10d采一次樣；果實采后迅速放入冰盒中，帶回實驗室放入-80℃冰箱中備用；

2）樣品處理

分別取大小均勻、色澤一致的洗凈晾干的葡萄15～20顆，用榨汁機打碎并混勻，迅速精確稱取勻漿1.00g，用90%的乙醇定容到25mL容量瓶中，稱重；在常溫下，用超聲波提取20-40min，取出、室溫冷卻后，加90%的乙醇補充到之前定容25mL時液體的重量；將提取樣品常溫下8000-12000r/min離心15-30min，取上清液，經0.25μm濾膜過濾后用作供試樣品；

3）標準溶液的配制

分別用超純水配制濃度為0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.6mg/mL、0.9mg/mL、1.2mg/mL、1.5mg/mL的葡萄糖、果糖和蔗糖的系列濃度標準工作液；進樣前經0.25μm濾膜過濾，取濾液進樣；

4）色譜條件

色譜柱為聚苯乙烯-二乙烯基苯鍵合的氨基糖柱Prevail?carbohydrate?ES（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為乙腈和水的混合物，其中，乙腈和水的體積比為70-80:30-20；流動相流速為1mL/min；柱溫：30℃-35℃；檢測器選用蒸發光散射檢測器（ELSD），檢測池溫度40℃-80℃，進樣量10μL；

5）線性相關性和精密度考察

以步驟3）配制的0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.6mg/mL、0.9mg/mL、1.2mg/mL、1.5mg/mL的葡萄糖、果糖、蔗糖的系列標準工作液，按步驟4）所述的色譜條件進樣分析并計算，得標準曲線回歸方程；