[發明專利]一種多負電荷血紅蛋白α亞基

在審

• 申請號: 201310184846.0
• 申請日: 2013-05-20
• 公開（公告）號: CN104163867A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 王子元;許鐵;劉抗;王菲;傅學斌;燕憲亮;楊紅寧
• 申請（專利權）人: 王子元;許鐵;王烽宇
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種構成血紅蛋白類紅細胞代用品人造血的組成成分：多負電荷血紅蛋白α亞基，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

輸血屬于臨床治療必須的基本治療手段。中國作為世界上人口最多的國家，每天都有大量的外傷、手術和急診患者需要輸血救治。特別是在各種自然災害、重大突發公共衛生事件和軍事沖突發生的現場，血液的需要量會大幅度增加，容易保藏和使用的人造血對于挽救生命具有重要的意義。此外，我國將逐漸進入老齡化社會，血液供給和需求的矛盾會更加突出。目前，我國血液制品數量不足或質量不高，不能滿足臨床需求，媒體經常報道某個城市鬧“血荒”的新聞。除了鼓勵更多人參加義務獻血之外，研究和掌握紅細胞代用品人造血制造技術并在臨床推廣使用才能徹底解決日益突出的血液供需矛盾。

因此，人造血產品的研究和開發關系到人民群眾的健康和和諧社會的建設，是社會發展中迫切需要解決的關鍵科技問題之一，具有重大的經濟價值和社會效益。人造血(artifical?blood)或血液替代品(blood?substitute)，是指能夠替代血液某一功能的制品。本發明所指的人造血是人工生產的，能夠替代紅細胞(red?blood?cells，RBCs)，具有吸收、運輸和釋放氧氣到組織功能的產品，又稱人造氧載體(oxygen?carriers)。

血紅蛋白類紅細胞代用品是利用人或動物的血紅蛋白做原料經修飾后用作人造血的一類。人的血紅蛋白是由兩個α亞基和兩個β亞基組成的四聚體。不在紅細胞之內，在循環系統中游離的血紅蛋白四聚體能夠首先解離成αβ二聚體，然后繼續解離成單體。由于分子量比較小，αβ二聚體以及單體都可以通過腎過濾，有腎毒性的副作用。為了降低和避免這個不良反應，目前多采用化學修飾的辦法，如交聯，聚合和偶聯等，加大血紅蛋白分子量。但是，這些方法并不能完全消除副作用。如，用化學交聯的血紅蛋白總有一定比例的血紅蛋白沒有被修飾。在動物實驗中甚至已交聯的血紅蛋白也可以解離產生腎過濾而大量出現在尿液中。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的不足之處，提供一種構成血紅蛋白類紅細胞代用品人造血的組成成分：多負電荷血紅蛋白α亞基。

為了實現本發明的目的，我們采用如下的技術方案予以實施：

一種多負電荷血紅蛋白α亞基，其特征在于：

所述的多負電荷血紅蛋白α亞基是由人血清白蛋白和人血紅蛋白α亞基組成的融合蛋白；

所述的融合蛋白是由人血清白蛋白和人血紅蛋白之間由連接肽連接而成；

所述的融合蛋白的N-末端由帶負電荷的人血清白蛋白結構域和C-末端的人血紅蛋白α結構域組成；

所述的融合蛋白多肽鏈氨基酸序列如序列表一所示。

進一步，所述的連接肽的改變相應改變融合蛋白多肽鏈氨基酸序列和長度，但整個融合蛋白結構和功能不變。

進一步，所述的融合蛋白的結構為折疊后三維結構。

一種多負電荷血紅蛋白α亞基的制備方法，其特征在于：所述的制備方法步驟如下：

一、通過用血液和肝臟組織中所提取的RNA用RT-PCR擴增的方法獲得所述的融合蛋白多肽鏈氨基酸序列或用化學方法全合成方法合成所述的融合蛋白多肽鏈氨基酸序列；

二、將步驟一所述的融合蛋白多肽鏈氨基酸序列克隆至原核表達載體中；

三、將步驟二所述的表達載體轉化至表達體系的細胞中；

四、通過IPTG誘導的方法鑒定含有所述的融合蛋白多肽鏈氨基酸序列的細胞；

五、對步驟四所述的細胞進行分離和純化。

進一步，所述的原核表達載體為pSumo-Mut。

再進一步所述的pSumo-Mut含有6xHis-Sumo標簽。

更進一步，所述的標簽被克隆所用的酶切位點保證正確地加到重組表達的多負電荷血紅蛋白α亞基的N末端。

有益說明

本發明所述的一種多負電荷血紅蛋白α亞基的制備方法，用于生產血紅蛋白類紅細胞代用品人造血的組成成分：多負電荷血紅蛋白α亞基，徹底解決血紅蛋白四聚體解離后的亞基經腎過濾引起人體不良反應的難題。