[發明專利]一種檢測蛋白水解酶活性的方法有效
| 申請號： | 201310184727.5 | 申請日： | 2013-05-17 |
| 公開（公告）號： | CN104165869A | 公開（公告）日： | 2014-11-26 |
| 發明（設計）人： | 楊光富;楊文超;孫琦;李俊;劉萬年 | 申請（專利權）人： | 華中師范大學 |
| 主分類號： | G01N21/64 | 分類號： | G01N21/64;G01N33/52;C09K11/06 |
| 代理公司： | 北京潤平知識產權代理有限公司 11283 | 代理人： | 王崇;劉國平 |
| 地址： | 430079 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 蛋白 水解 活性 方法 | ||
1.一種檢測蛋白水解酶活性的方法，該方法包括將含有蛋白水解酶的待測樣品與香豆素衍生物熒光探針接觸，得到接觸后的物料，檢測接觸后的物料在激發光下發出的熒光的強度，其特征在于，所述香豆素衍生物熒光探針為式（1）或式（2）所示結構的非肽香豆素衍生物；
式（1）?????????????????????????式（2）
其中，在式（1）中R1為甲基或乙基。
2.根據權利要求1所述的方法，其中，在式（1）中R1為乙基。
3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述香豆素衍生物為式（1）所示結構，所述蛋白水解酶為彈性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和羧肽酶中的一種或多種。
4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述香豆素衍生物為式（2）所示結構，所述蛋白水解酶為彈性蛋白酶。
5.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其中，相對于1μM的蛋白水解酶，所述香豆素衍生物的用量為1-100μM。
6.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其中，接觸的條件包括：溫度為25-37℃，pH值為6-8，時間為5-30min。
7.根據權利要求1-4中任意一項所述的方法，其中，所述激發光的波長為360-405nm，所述熒光的發射波長為500-520?nm。
8.一種檢測樣品中蛋白水解酶活性的試劑盒，該試劑盒包括：香豆素衍生物熒光探針以及待測蛋白水解酶的標準品；所述香豆素衍生物熒光探針為式（1）或式（2）所示結構的非肽香豆素衍生物；
式（1）?????????????????????????式（2）
其中，在式（1）中R1為甲基或乙基。
9.根據權利要求8所述的試劑盒，其中，在式（1）中R1為乙基。
10.香豆素衍生物熒光探針在制備檢測樣品中蛋白水解酶活性的試劑盒中的用途，所述香豆素衍生物熒光探針為式（1）或式（2）所示結構的非肽香豆素衍生物；
式（1）?????????????????????????式（2）
其中，在式（1）中R1為甲基或乙基。
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