[發明專利]鏈霉素抗生素分子印跡生物傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201310184510.4
• 申請日: 2013-05-17
• 公開（公告）號: CN103243367A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 張娟琨;陳怡;劉利娟
• 申請（專利權）人: 天津前方科技有限公司
• 主分類號: C25D9/02
• 分類號: C25D9/02;G01N27/416;G01N27/327
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 王來佳

技術領域

本發明屬于化學分析領域，涉及生物傳感器，尤其是一種鏈霉素抗生素分子印跡生物傳感器的制備方法。

背景技術

鏈霉素（Streptomycin，STR）是一種氨基糖苷類抗生素，對于革蘭氏陰性菌和部分革蘭氏陽性菌，尤其是結核桿菌，具有顯著的抗菌活性，在畜牧業和水產業中作為飼料添加劑和治療動物疾病廣泛應用。但是，鏈霉素對聽神經有明顯的毒性作用，能造成耳聾，對過敏胎兒更為嚴重，具有腎毒性，濫用、不遵守休藥期、超量用藥等造成的鏈霉素殘留，會直接威脅人、畜的健康。STR殘留物可存在于肉類、肝、腎、牛奶以及蜂蜜中。各國對STR殘留限量都做出了明確規定，我國農業部2002年發布的第235號文件《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規定鏈霉素在牛奶中殘留限量為200μg/L，在肌肉、脂肪、肝中為600μg/kg，在腎中為1000μg/kg。

目前，國內外測定鏈霉素的主要方法有分光光度法、微生物法、免疫學檢測法、液相色-串聯質譜法（LC-MS/MS）和熒光衍生測定法等。雖然，一些理化檢測方法比較靈敏、精確，但由于鏈霉素缺少較強的紫外吸收生色基團，檢測前往往需要通過一系列的衍生方法進行處理，操作繁瑣、耗時長；高效液相色譜儀、質譜儀等大型設備的使用，對發明人員要求較高，檢測成本高。因此，建立一種快速、簡便的檢測方法對于鏈霉素殘留檢測是非常重要的。

分子印跡技術（molecularimprintingtechnique，MIT）亦稱分子模板技術，是指以某一特定的目標分子為模板，制備對該分子具有特異選擇性聚合物的過程。分子印跡技術自上世紀90代有了迅猛發展，分子印跡聚合物（MIPs）常作為傳感器的識別元件或改性材料應用環境檢測、抗生素檢測等領域。電化學聚合電活性功能單體制備的分子印跡聚合物，既具有類似金屬的特性，也保留了有機聚合物的性能，且與滴涂和旋涂等化學方法在導電基質表面聚合的MIP薄膜相比具有其優越性，如制備簡單、膜厚可控、高重現性，以及在水溶液中聚合和操作的可行性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測靈敏度高、重現性好、選擇性高的鏈霉素抗生素分子印跡生物傳感器的制備方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：

一種鏈霉素抗生素分子印跡生物傳感器的制備方法，制備傳感器的步驟如下：

⑴玻碳電極預處理：將玻碳電極拋光、清洗，然后將電極置于0.5mol/LH₂SO₄溶液中，在－1.0～＋0.8Ｖ電位區間內，以0.1V/s的掃速進行循環伏安掃描，直至得到穩定的循環伏安響應，得到具有活性的電極；

⑵分子自組裝膜修飾電極

將上述處理好的電極浸入聚合底液，通純N₂10min后，在0～0.8V的電位區間內循環伏安掃描20圈，掃描速度為0.05V/s；

所述聚合物底液為含有功能單體鄰苯二胺、模板分子硫酸鏈霉素的PBS溶液，pH=5.0；

所述聚合底液中功能單體：模板分子的摩爾濃度比為4:1；

⑶洗脫模板分子

采用上述步驟⑵修飾電極，再經70wt%乙醇溶液洗脫后，得到鏈霉素抗生素分子印跡生物傳感器。

而且，所述玻碳電極拋光、清洗的方法為：將玻碳電極在涂有0.05μmAl₂O₃漿液的麂皮上“8”字型拋光至鏡面，水沖洗后，依次用1:1HNO₃、無水乙醇和蒸餾水中超聲清洗3min，以洗去電極表面殘存的化學物質以及惰化層。

而且，所述步驟⑶洗脫15分鐘。

而且，所述步驟⑵聚合底液中含有0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液。

而且，所述步驟⑵聚合物底液采用0.1mol/L的KCl溶液作為支持電解質。

本發明的優點和有益效果為：

1、本發明基于分子印跡技術，通過電化學聚合方法，利用循環伏安法以硫酸鏈霉素為模板分子、鄰苯二胺為功能單體制備出分子印跡電極，建立了快速、靈敏的鏈霉素檢測方法，為小型化和自動化、低檢測限的電化學傳感器的發明提供依據。