[發明專利]一種與胎兒先天性心臟病相關的母體血清/血漿miRNA標志物及其應用

有效

• 申請號: 201310183498.5
• 申請日: 2013-05-16
• 公開（公告）號: CN103290116A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 韓樹萍;余章斌;曹荔;錢玲梅;朱莎莎;郭錫熔;孔麗萍;朱春;朱金改;潘亞
• 申請（專利權）人: 南京市婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;劉成群

發明領域

本發明屬于基因工程和生殖醫學領域，涉及一種與胎兒先天性心臟病相關的母體血清/血漿miRNA標志物及其應用。

背景技術

先天性心臟病（congenital?heart?disease，CHD）是由于胎兒心臟大血管在母體內發育異常或部分停頓所導致的先天性心臟大血管畸形，在出生后表現為不同程度的心臟血管結構和功能的異常，是一種常見的先天性畸形。每年約有5‰-8‰的新生兒患有CHD，這一發生率是染色體異常的6倍，神經管缺陷的4倍。大多數患兒在出生后都需要接受手術治療進行矯正，如未經治療，約有1/3的患兒在生后1年內可因病情嚴重和復雜畸形而死亡。因此，早期診斷、早起干預、及時合理治療是減少CHD發病率和死亡率的關鍵，是亟待解決的重大科學問題。

目前，產前診斷CHD的方法主要為胎兒超聲心動圖，其對于指導產前咨詢，產前、新生兒期檢測與治療，降低圍生兒病死率有重大意義。但是，不同國家及地區產前篩查CHD的發展水平并不平衡，各地篩查方案和指標缺乏統一的技術規范和正規的質量控制，不同地區產前CHD的檢出率差異很大。孕婦腹壁厚度、羊水量、胎位、超聲儀器的分辨率以及檢查醫生的專業技術水平等都可能會影響到檢查的最終結果。因此，我們亟需發現更加明確而有效的生物標記物，對CHD做出輔助早期診斷，這將有助于早期干預，早起治療，減少CHD的發生率，提高患兒的生存率。

miRNA作為當今分子生物學研究領域的一個熱點，它是一類生物體內自然生成的小分子非編碼RNA，其成熟狀態長約19-23個核苷酸，具有遺傳高度保守性。miRNA通過參與調節其特異靶基因的表達，來控制蛋白的產生，調節發育時序，從而參與細胞的增殖，分化，代謝與凋亡，在機體生長發育及疾病發生過程中發揮重要作用。隨著miRNA研究的快速發展，越來越多的miRNAs被人們發現，miRNAs與疾病的關系也漸漸成為研究的熱點與重點。近年來，已經發現miRNAs通過負反饋基因的表達與乳腺癌，肺癌，胃癌，糖尿病，心臟病等的發病密切相關。

生物標記物是指能將機體的生理和病理狀態區分開來的生物分子。篩選到可用于CHD早期發現、早期診斷的生物標志物可大大提高CHD患兒的臨床治療效果。最新數據顯示心臟組織有其特異性的miRNAs，即這些miRNAs的表達水平與相同組織的正常細胞存在顯著差異，而特征性的miRNAs異常表達可望成為用于CHD早期診斷的生物標志物，顯示了美好的臨床應用前景。

近年來研究證實，miRNAs能穩定存在于血清/血漿中，且含量豐富、易于定量檢測，具有顯著的疾病特異性。這些特點都使得運用定性和定量miRNA分子技術，將血清miRNA作為生物標志物比傳統的標記方法將更加有效，為生物標記技術及疾病診斷開拓了新境界。

目前有關血清/血漿miRNA的來源還沒有定論，有些研究者認為腫瘤患者血清/血漿中的miRNA來源于靶組織，但其表達變化與靶組織的一致性還有待探討；也有研究者認為miRNA可以被選擇性富集到“microparticles(MPs)”或“exosomes”中，由細胞以“microvesicles微泡”脫落的方式主動向外分泌。具有共識的意見是，組織/細胞來源的miRNA表達譜與血清/血漿來源的miRNA表達譜是兩個不同的體系，二者的表達譜并不完全一致，也沒有文獻報導二者存在關聯性。不同來源的miRNA表達譜中特定miRNA的表達不一定在相同時段發揮相同的調控作用，組織/細胞中表達的miRNA不一定在血清/血漿中具有同樣的表達量。鑒于目前還沒有用于CHD輔助早期診斷的較為穩定的生物標志物的現狀，將母血清/血漿miRNA作為篩選CHD的生物標志物，并研制相應的輔助早期診斷試劑盒，具有廣泛的科研價值和臨床應用的前景。

發明內容

本發明的目的是針對上述技術問題，提出一種與CHD相關的母血清/血漿miRNA標志物。

本發明另一個目的是提供上述miRNA標志物的引物或探針。

本發明還有一個目的是提供上述miRNA標志物及其引物或探針在制備CHD輔助早期診斷中的應用。

本發明再一個目的是提供CHD輔助早期診斷試劑盒。