[發明專利]一種抑癌能力遺傳體質評估的基因檢測方法及中醫體質調理方案

無效

• 申請號: 201310183088.0
• 申請日: 2013-05-17
• 公開（公告）號: CN103509855A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 毛丹丹;王校;傅詠南
• 申請（專利權）人: 上海中優門診部有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抑癌基因遺傳體質評估的基因檢測方法及中醫體質調理方案，其特征在于，其方法為：?

步驟1．檢測的樣品類型與采樣方法：

用采樣拭在20-30個被測者口腔中分別左右兩腮至少需要各上下刮40次以上，以保證采集到足量的細胞樣本；

步驟2．基因組DNA的抽提方法：

采用硅膠吸附法抽提每一個口腔上皮細胞樣本的基因組DNA，時間為2小時－2.5小時，共抽提20－30個被測者樣本，經電泳檢測后，用肉眼可見清晰白色條帶即可判斷獲得的DNA能進入下一步檢測；

步驟3：熒光定量PCR反應

????將每一個被測者樣本分別放入3個反應孔，同時檢測抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO1：T-885G、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO2：Gln1136Lys、抑癌基因TP53（TP53）SEQ?ID?NO3：Arg72Pro?3個位點，20－30個被測者樣本就有60-90個反應孔，并增設不含DNA模版的NTC空白對照孔；

每一個反應孔的基因分型根據下表的引物和探針設計，采用TaqMan?-MGB技術，進行檢測試劑合成；

在每一個反應孔中加入試劑為熒光定量PCR反應體系，總體積為10μl，即濃度為20ng/μl?的DNA模板2μl?、1μl?10X熒光定量PCR反應緩沖液ABI?Taqman???MGB、0.1μl?25mM?d?NTP合成DNA的四種脫氧核苷酸底物、0.5μl?25mM?MgCl₂溶液、0.02μl（5units/μl）Taq?DNA聚合酶、去離子水5.43μl、3個位點分別采用不同的正向引物（20μM，0.225μl）、反向引物（20μM，0.225μl）、VIC熒光探針（10μM，0.25μl）和FAM熒光探針（10μM，0.25μl）工具進行檢測，?

將101-151個反應孔在ABI9700型PCR擴增儀上進行反應，先進行預熱：

50℃、2分鐘，95℃、10分鐘，然后再進行60個循環的95℃、30秒，60℃、1分鐘、反應結束后取出后再放入ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量，并自動將20－30個被測者樣本檢測3個點位的數據對號入座到3個圖中，同時生成3張圖，是抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO1：

T-885G圖、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO2：Gln1136Lys圖、抑癌基因TP53（TP53）SEQ?ID?NO3：Arg72Pro圖；?

步驟4：SNP基因型分析

將ABI7900型熒光定量PCR儀上顯示的最終樣本熒光信號的3個表和一個NTC空白對照進行比較，每個位點理論上存在三種不同的信號，純VIC熒光信號、VIC和FAM雜合熒光信號以及純FAM熒光信號，分別代表該位點三種不同的基因型；

(1)、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO1：T-885G

在檢測結果圖中，共有21-31個點，每個點代表一個被測者樣本的檢測結果，坐標軸（X：0.4-0.5?Y：0.3-0.4）區域為空白對照、坐標軸（X：0.2-0.4?Y：1.1-1.3）區域為TT基因型、坐標軸（X：0.6-0.8?Y：0.7-1.0）區域為TG基因型、坐標軸（X：0.7-0.9?Y：0.3-0.4）區域為GG基因型，其中，TT、TG為風險基因型，攜帶風險基因型時，蛋白質翻譯減少或編碼突變型蛋白質時均可導致細胞的惡變，導致癌癥易感性增加；

（2）、抑癌基因TP53（P53BP1）SEQ?ID?NO2：Gln1136Lys

在檢測結果圖中，共有21-31個點，每個點代表一個被測者樣本的檢測結果，坐標軸（X：0.0-0.1?Y：0.1-0.3）區域為空白對照、坐標軸（X：0.0-0.1?Y：1.1-1.3）區域為AA基因型、坐標軸（X：0.2-0.3?Y：0.9-1.2）區域為AG基因型、坐標軸（X：0.35-0.45?Y：0.4-0.6）區域為CC基因型，其中，AA為風險基因型，攜帶風險基因型時，蛋白質翻譯減少或編碼突變型蛋白質時均可導致細胞的惡變，導致癌癥易感性增加；

（3）、抑癌基因TP53（TP53）SEQ?ID?NO3：Arg72Pro

在檢測結果圖中，共有21-31個點，每個點代表一個被測者樣本的檢測結果，坐標軸（X：0.0-0.1?Y：0.3-0.4）區域為空白對照、坐標軸（X：0.1-0.3?Y：1.6-1.9）區域為CC基因型、坐標軸（X：0.6-0.8?Y：1.1-1.4）區域為CG基因型、坐標軸（X：0.9-1.1?Y：0.4-0.6）區域為GG基因型，其中，CC為風險基因型，攜帶風險基因型時，蛋白質翻譯減少或編碼突變型蛋白質時均可導致細胞的惡變，導致癌癥易感性增加；

每一個被測者的3個點落在3個表上哪個區域，即可知道被測者抑癌基因的遺傳體質；

步驟5：根據檢測結果給予個性化中醫體質調理指導建議，主要有以下幾點：

1、抑癌基因檢測綜合評估風險為高風險者，且中醫體質分型為淤血質、陽虛質、痰濕質等腫瘤高風險體質，通過中醫處方、針灸、按摩等手段改善體質類型，并應用食療藥膳等寓醫藥于食餌的方法，以扶助正氣，激發胃氣，促進食欲，提高機體免疫機能，改善全身狀況；

2、抑癌基因檢測綜合評估風險為低風險者，但中醫體質分型為淤血質、陽虛質、痰濕質等腫瘤高風險體質，通過藥膳等手段有針對的調理改善被測者的偏頗體質，扶助正氣，改善全身狀況，預防腫瘤的發生發展。