[發(fā)明專利]一種分離制備楊梅葉原花色素的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310181254.3
• 申請(qǐng)日: 2013-05-15
• 公開（公告）號(hào): CN103265519A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉興乾;傅瑜;過塵杰;孫玉敬;陳建初;劉東紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D311/62
• 分類號(hào): C07D311/62
• 代理公司: 杭州天勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 周麗娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物功能組分領(lǐng)域，尤其涉及一種分離制備楊梅葉原花色素的方法。

背景技術(shù)

楊梅是我國南方的特產(chǎn)水果，目前有關(guān)楊梅的研究利用主要以楊梅果實(shí)為主。楊梅樹四季常青，枝繁葉茂，每年有大量被修剪下來的楊梅葉常被當(dāng)作廢棄物而丟棄。已有研究表明楊梅葉中富含酚類物質(zhì)，具有抗氧化、抗菌抗病毒等生物活性，是一種具有開發(fā)潛力的植物資源。因此，如果能將這些廢棄物加以合理利用，使其成為“廉價(jià)”的加工原料，不僅符合“低碳、綠色、環(huán)保”的時(shí)代主題，更可以在促進(jìn)資源綜合利用的同時(shí)，帶來可觀的經(jīng)濟(jì)效益。

原花色素是廣泛存在于植物界的多酚類物質(zhì)之一。大量研究結(jié)果表明其具有抗氧化、抗癌、預(yù)防和治療心血管疾病、抗過敏及抗炎、防輻射、皮膚保健與抗皺等等有益人類健康的活性功能，而這些功能與其結(jié)構(gòu)組成密切相關(guān)。分離提取楊梅葉中相同分子量的原花色素，研究不同的分子量對(duì)于原花色素功能的影響，有助于對(duì)原花色素活性功能與分子量之間關(guān)系的進(jìn)一步了解，為原花色素的實(shí)際應(yīng)用提供理論依據(jù)。目前研究的植物原花色素以原花青素類最多，典型的例子如葡萄籽原花青素。開發(fā)更多更豐富的原花色素天然資源，如楊梅葉原花色素，具有廣闊的應(yīng)用開發(fā)前景。

原花色素屬于植物源類黃酮，除了在食品質(zhì)量中參與澀味，苦味，香味和顏色形成，還具有很多有益健康的作用。根據(jù)原花色素聚合度（即組成單元的數(shù)目）可以將原花色素分為單體原花色素、低聚原花色素和高聚原花色素。單體原花色素包括黃烷-3,4-二醇和黃烷-4-醇等，低聚原花色素一般指聚合度為2-5的原花色素，高聚原花色素一般指聚合度≥6的原花色素，低聚原花色素與高聚原花色素之間并沒有明顯的界限((a)Rasmussen,S.E.,Frederiksen,H.,Struntze?Krogholm,K.,&Poulsen,L.(2005).Dietary?proanthocyanidins:occurrence,dietary?intake,bioavailability,and?protection?against?cardiovascular?disease.Molecular?Nutrition&Food?Research,49(2),159-174.(b)Quideau,S.,Deffieux,D.,Douat-Casassus,C.,&Pouysegu,L.(2011).Plant?polyphenols:chemical?properties,biological?activities,and?synthesis.Angew?Chem?Int?Ed?Engl,50(3),586-621.)。

因?yàn)樵ㄉ氐亩鄻有院徒Y(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，分析和描述原花色素的結(jié)構(gòu)是一個(gè)艱難的任務(wù)。當(dāng)分子量超過四聚物時(shí)，結(jié)構(gòu)和立體異構(gòu)體的可能數(shù)量變得很多，另外，當(dāng)沒食子酸單元也存在時(shí)其分離變得更困難。原花色素的生物活性跟其聚合度密切相關(guān)，目前市場(chǎng)上，只有少量原花青素二聚體的標(biāo)準(zhǔn)品可供購買，且價(jià)格昂貴，嚴(yán)重限制了原花色素的研究和開發(fā)。

目前在原花色素的正相色譜分離中，通常采用的是二氯甲烷/甲醇/乙酸/水體系(Liu,Y.X.,Pan,Q.H.,Yan,G.L.,He,J.J.,&Duan,C.Q.(2010).Changes?of?Flavan-3-ols?with?Different?Degrees?of?Polymerization?in?Seeds?of?′Shiraz′,′Cabernet?Sauvignon′and′Marselan′Grapes?after?Veraison.Molecules,15(11),7763-7774.)，然而，此體系中應(yīng)用了強(qiáng)酸以及毒性較強(qiáng)的含氯溶劑，并不適合原花色素的大規(guī)模分離制備。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種分離制備楊梅葉原花色素的方法，用于快速、準(zhǔn)確獲得大量楊梅葉中一定分子量的原花色素低聚體，試劑毒性小、安全性較高。

一種分離制備楊梅葉原花色素的方法，包括：

（1）將楊梅葉粉末加入溶劑中進(jìn)行浸提，分離獲得浸提物；

（2）通過柱層析對(duì)浸提物進(jìn)行分離純化，獲得原花色素類物質(zhì)；

（3）利用液相色譜對(duì)原花色素類物質(zhì)按分子量大小進(jìn)行分離；

其中，所述的液相色譜的流動(dòng)相由流動(dòng)相A和流動(dòng)相B組成，洗脫方式為梯度洗脫；

流動(dòng)相A為正己烷、甲醇、乙酸乙酯按體積比8-11:2-4:1混合而成，流動(dòng)相B為正己烷、甲醇、乙酸乙酯按體積比1-2:2-4:1混合而成；