[發明專利]日本血吸蟲重組抗原SjPDI及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201310173813.6
• 申請日: 2013-05-13
• 公開（公告）號: CN104152477A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 林矯矯;曹曉丹;傅志強;洪煬;張旻;韓艷輝;王馨茁;李長健;伍妙梨;郭小勇;陸珂;朱傳剛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N9/90;C12N1/21;A61K39/00;A61P33/12;C07K16/40;G01N33/573
• 代理公司: 上海序倫律師事務所 31276
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種日本血吸蟲重組抗原及其制備方法和應用。

背景技術

血吸蟲病是由血吸蟲引起的一種重要人畜共患病，在熱帶和亞熱帶地區約有2億人感染，在我國主要流行的是日本血吸蟲病。截止到2011年，全國共有血吸蟲病流行縣(市、區)454個，血吸蟲病人28.68萬，全國實有釘螺面積372664.10hm2，較2010年增加了932.08hm2。我國血吸蟲病防治工作仍面臨挑戰，形勢不容樂觀，因此，加強抗血吸蟲疫苗候選分子和新藥物靶標的篩選顯得尤其重要。

在宿主體內，寄生蟲組織結構和行為方式會發生變化，蟲體移行于宿主體液和組織之間，由腸上皮和(或)表皮以及其他特異排泄分泌器官在整個生命周期釋放或分泌的排泄分泌產物能引起宿主免疫調節反應。這些成分直接暴露于宿主免疫系統，誘導宿主的免疫應答，干擾宿主的免疫反應過程，使血吸蟲可以逃脫宿主的免疫攻擊，同時還是宿主體內存在活蟲體的重要指征。血吸蟲排泄分泌蛋白的重要功能及研究意義有：①排泄分泌蛋白含有一些重要的酶、信號傳導蛋白、解毒分子，在血吸蟲生長發育中發揮了重要的作用；②血吸蟲排泄分泌蛋白的不斷變化對血吸蟲逃避宿主免疫攻擊，在宿主體內存活、發育、繁殖中扮演著重要角色，在免疫逃避機制中起到了重要作用；③一些已呈現較好免疫保護效果的血吸蟲疫苗候選分子，已證明在血吸蟲排泄分泌產物中呈現；④由于排泄分泌蛋白暴露于宿主的免疫系統并引起宿主的免疫應答，一些排泄分泌蛋白已被證明是良好的血吸蟲病診斷抗原。因此，對排泄分泌蛋白總成分的鑒定有利于理解血吸蟲如何調節寄主免疫應答以建立慢性感染，以及與寄主相互作用機制。同時，這些信息有利于發現控制血吸蟲病的疫苗候選分子、新的診斷試劑及新藥物靶點。

蛋白質二硫鍵異構酶(Protein?disulfide?isomerase，PDI)被鑒定為一種排泄分泌蛋白，在二硫鍵形成過程中起關鍵作用。PDI屬于硫氧還蛋白家族，基因含有兩個獨立的活性位點，每個活性位點包含兩個半胱氨酸(WCGHCK)，PDI催化底物二硫鍵的形成及重排以形成有活性的天然結構。在肝片吸蟲中，PDI保護蟲體免受氧化壓力的影響；在新孢子蟲和弓形蟲中，PDI在寄生蟲-宿主相互作用中扮演重要角色。有關PDI的研究在日本血吸蟲中還未被報道，因此，深入研究SjPDI的生物學功能及在血吸蟲生長發育中的作用具有重要意義。

發明內容

本發明要解決目前缺乏抗血吸蟲高效疫苗的技術問題，提供一種日本血吸蟲重組抗原，該重組抗原包含日本血吸蟲蛋白質二硫鍵異構酶(SjPDI)的SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列，具有良好的免疫原性，適于作為抗血吸蟲病候選疫苗。

此外，還需要提供一種上述日本血吸蟲重組抗原的制備方法和應用。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現：

在本發明的一個方面，提供了一種重組載體，包含日本血吸蟲PDI基因，該基因序列為編碼SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列的核苷酸序列。

優選的，所述重組載體的空載體為原核表達載體pET28a(+)，所述日本血吸蟲PDI基因插入在空載體pET28a(+)的EcoR?I和Sal?I兩個酶切位點之間。

更優選的，所述日本血吸蟲PDI基因序列為SEQ?ID?NO.2所示核苷酸序列。

在本發明的另一方面，還提供了一種日本血吸蟲重組抗原，該重組抗原由上述重組載體經誘導表達制得。

本發明的日本血吸蟲重組抗原，包含日本血吸蟲的蛋白質二硫鍵異構酶氨基酸序列，還包含由部分載體序列表達的具有幾個組氨酸的標簽序列，該標簽序列僅是便于后續的重組抗原蛋白純化。

在本發明的另一方面，還提供了一種包含上述重組載體的宿主細胞。

在本發明的另一方面，還提供了一種上述日本血吸蟲重組抗原的制備方法，包括以下步驟：

構建含日本血吸蟲PDI基因的重組表達載體，所述基因是編碼SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列的日本血吸蟲PDI基因，所述重組表達載體的空載體為原核表達載體pET28a(+)，所述日本血吸蟲PDI基因插入在空載體pET28a(+)的EcoR?I和Sal?I兩個酶切位點之間；

將所述重組表達載體轉化入大腸桿菌宿主細胞；

培養包含重組表達載體的大腸桿菌宿主細胞，并在合適條件下，誘導該重組表達載體表達日本血吸蟲PDI蛋白；

純化重組表達的日本血吸蟲PDI蛋白。