[發明專利]水稻轉錄因子Os01g23760基因的應用

有效

• 申請號: 201310172967.3
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN103266114A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 劉軍;鄧煒先;楊振明;劉斌;趙濤;李宏宇;林辰濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C12N1/21;A01H5/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛

1.水稻轉錄因子Os01g23760基因在提高水稻產量及調控水稻高桿性狀中的應用，所述水稻轉錄因子Os01g23760基因的序列為：

i）Seq?ID?No.1所示的核苷酸序列；

ii）在嚴格條件下與Seq?ID?No.1所示序列雜交的核苷酸序列；

所述嚴格條件為在含0.1%SDS的0.1×SSPE或含0.1%SDS的0.1×SSC溶液中，在65℃下雜交，并用該溶液洗膜。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，其是將水稻轉錄因子Os01g23760基因的CDS序列構建到VP64的下游，轉化水稻，篩選并最終獲得轉基因水稻；

其中，VP64是由4個轉錄因子激活基序VP16融合而成的，VP16來自單純皰疹病毒（Herpes?simplex?virus），VP64的核苷酸序列如Seq?ID?No.3所示。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，其是將水稻轉錄因子Os01g23760基因的CDS序列通過Gateway系統構建到VP64的下游，轉化水稻，篩選并最終獲得轉基因水稻。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，包括以下步驟：

1）根據水稻轉錄因子Os01g23760基因序列設計PCR擴增引物對，其為正向引物F：5'-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGCGCGACGAAAGATCCC-3'和反向引物R：5'-CAAGAAAGCTGGGTCGCTCCCCCAATGCCGGG-3'；

2）以野生日本晴水稻cDNA為模板，利用上述引物，通過PCR擴增獲得Os01g23760基因全序列；

3）將PCR產物克隆至pDONER克隆載體上，經測序正確；

4）以雙元表達載體pCAMBIA1300左右邊界包含的序列為骨架序列，通過體外重組，將Ubi：promoter-VP64-Gateway表達單元、35S?promoter-asRED表達單元和35S?promoter-bar表達單元與之融合構建，得到載體nVP64-bar-asRED的全序列如Seq?ID?No.4所示；

5）通過LR反應將目的基因Os01g23760構建到載體nVP64-bar-asRED上，獲得植物表達載體Ubi：VP64-Os01g23760，其序列如Seq?ID?NO.5所示；

6）采用農桿菌介導法、直接DNA轉化、微注射或電穿孔方法將載體Ubi：VP64-Os01g23760導入水稻中，篩選并最終獲得轉基因水稻。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，步驟6）采用農桿菌介導的方法，利用pCAMBIA1301將載體Ubi：VP64-Os01g23760轉入水稻愈傷組織中，用含誘導劑和農桿菌的AAM轉化液進行轉化，轉化后的材料經過共培養、脫菌、篩選、分化、生根、煉苗和移栽，用Basta篩選轉基因水稻植株。

6.植物表達載體Ubi：VP64-Os01g23760，其核苷酸序列如Seq?ID?NO.5所示。

7.含有權利要求6所述載體的工程菌。

8.權利要求6所述載體在提高水稻產量及調控水稻高桿性狀中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，采用農桿菌介導法、直接DNA轉化、微注射或電穿孔方法將載體Ubi：VP64-Os01g23760導入水稻中，篩選并最終獲得轉基因水稻。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，采用農桿菌介導的方法，利用pCAMBIA1301將載體Ubi：VP64-Os01g23760轉入水稻愈傷組織中，用含誘導劑和農桿菌的AAM轉化液進行轉化，轉化后的材料經過共培養、脫菌、篩選、分化、生根、煉苗和移栽，用Basta篩選轉基因水稻植株。