[發明專利]銀杏內酯注射液及含量測定方法

有效

• 申請號: 201310172831.2
• 申請日: 2012-04-23
• 公開（公告）號: CN103239487A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 孫毅;朱永紅;童正兵;王婕
• 申請（專利權）人: 成都百裕科技制藥有限公司
• 主分類號: A61K36/16
• 分類號: A61K36/16;A61K9/08;G01N30/36;A61K127/00
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1.銀杏內酯注射液的檢測方法，其特征在于檢測的項目和方法如下：

(1)蛋白質：取銀杏內酯注射液2ml，加水制成50ml，作為供試品溶液，稱取考馬斯亮藍G-250約50mg，溶于25ml乙醇中，再加入85％(w/v)的磷酸50ml，加水稀釋至500ml，搖勻，過濾，精密量取濾液5ml置試管中，再加入1ml供試品溶液，搖勻，放置3min，同法做空白，于595nm波長下，測定吸光度，供試品溶液吸光度小于0.05；

(2)鞣質：取蛋白質檢查項供試品溶液1ml加入稀醋酸1滴，再加明膠氯化鈉試液5滴，搖勻，放置10分鐘，未出現渾濁或沉淀；

(3)樹脂：取蛋白質檢查項供試品溶液5ml，加鹽酸1滴，放置30分鐘，無樹脂狀物質析出；

(4)草酸鹽：取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，用稀鹽酸調節pH值至1～2，濾過，濾液用氨水調節pH值為5～6，加3％氯化鈣溶液3滴，放置10分鐘，未出現渾濁或沉淀；

(5)鉀離子：取蛋白質檢查項供試品溶液2ml，置10ml納氏比色管中，加堿性甲醛溶液0.6ml、3％EDTA溶液2滴、3％四苯硼鈉溶液0.5ml，加水稀釋至10ml，另取標準氯化鉀溶液0.8ml，同法試驗，濁度低于對照溶液。

2.銀杏內酯注射液中有效成分含量的測定方法，其特征在于：

色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以25∶10∶65甲醇-四氫呋喃-水為流動相；用蒸發光散射檢測器，漂移管溫度：105℃；載氣流速：3.00L/min；柱溫：40℃；理論板數按白果內酯峰計算應不低于2500，白果內酯峰與銀杏內酯C峰的分離度應大于1.5；

對照品溶液的制備：分別精密稱取白果內酯對照品、銀杏內酯A對照品、銀杏內酯B對照品、銀杏內酯C對照品適量，加甲醇制成每1ml分別含0.15mg、0.12mg、0.1mg、0.1mg的混合溶液，搖勻，作為對照品溶液；

供試品溶液的制備：精密量取銀杏內酯注射液1ml，加磷酸鹽緩沖溶液14ml，搖勻，上Extrelut-20柱，吸附15分鐘，用乙酸乙酯100ml洗脫，收集洗脫液，于水浴上蒸干，殘渣用流動相溶解并轉移至10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液；

測定法：分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl和供試品溶液15μl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標兩點法對數方程分別計算白果內酯、銀杏內酯A、銀杏內酯B和銀杏內酯C的含量。

3.根據權利要求2的銀杏內酯注射液中有效成分含量的測定方法，其中供試品溶液的制備步驟中所加的磷酸鹽緩沖溶液的pH為6.5。

4.根據權利要求3的銀杏內酯注射液中有效成分含量的測定方法，其中所測定的銀杏內酯注射液每1ml含銀杏萜類內酯以白果內酯(C₁₅H₁₈O₈)、銀杏內酯A(C₂₀H₂₄O₉)、銀杏內酯B(C₂₀H₂₄O₁₀)和銀杏內酯C(C₂₀H₂₄O₁₁)的總量計，含量為1-10mg/ml，優選4.25～5.75mg。