[發明專利]禽流感病毒NS1蛋白B細胞抗原表位多肽及其應用

有效

• 申請號: 201310172465.0
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN103333224A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 王秀榮;包紅梅;姜永萍;陳化蘭
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/44;C12N15/63;G01N33/68
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及抗原表位多肽，尤其涉及禽流感病毒NS1蛋白B細胞抗原表位多肽，本發明還涉及該抗原表位多肽在制備診斷或檢測禽流感病毒感染藥物中的應用，屬于分子免疫學領域。

背景技術

禽流感（Avian?influenza，AI）是由正粘病毒科流感病毒屬A型AI病毒(AIV)所引起的一種禽類傳染病。根據致病力不同AIV可分為高致病性（HPAIV）、低致病性(LPAIV)。近年來HPAIV在全球范圍內呈現流行態勢。

疫苗免疫接種是預防禽流感傳播的有效措施。然而疫苗的大范圍使用，免疫雞群血清學陽性率極高，與病毒感染途徑引起的血清學陽性相混淆。這兩種途徑發生的血清學改變，除疫苗本身帶有特定標記或者采用亞單位疫苗外，通過現有的血清學檢測技術，如血凝抑制試驗、ELISA、瓊脂擴散實驗等均不能鑒別疫苗免疫與病毒感染，給禽流感的監控工作帶來一定困擾，因此很多研究開始關注禽流感感染和免疫的鑒別(Differentiation?of?infected?and?vaccinated?animals)方法研究。

AIV屬于單股負鏈RNA病毒，由8個節段組成，分別編碼血凝素（HA）、神經氨酸酶（NA）、聚合酶蛋白（PA、PB1、PB2）、核蛋白（NP）、基質蛋白（M）、非結構蛋白（NS）。NS基因具有兩個ORF，ORF1編碼202～237個氨基酸的NS1蛋白（約為26ku），ORF2編碼121個氨基酸的NS2蛋白（約為14ku）。NS在感染早期大量合成，存在于細胞核內，不存在于成熟的病毒粒子中，NS1蛋白屬于非結構蛋白，可以利用NS1蛋白作為檢測抗原對免疫雞群中野毒感染和滅活疫苗產生的抗體進行鑒別檢測。因此，目前對流感病毒感染和免疫的鑒別研究主要集中在NS1蛋白上（郭瑩瑩，吳春艷，王靖飛.禽流感分離株GD/1/96(H5N1)非結構蛋白結構建模[J].中國預防獸醫學報，2010，03:171-174；Avellaneda?G,Mundt?E,Lee?C?W,et?al.Differentiation?of?infected?and?vaccinated?animals(DIVA)using?the?NS1protein?of?avian?influenza?virus[J].Avian?Dis,2010,54(1Suppl):278-286.）。

MAb結合噬菌體隨機展示肽庫技術是目前應用最廣、發展最快的抗原表位篩選平臺之一。該技術已成功應用于多種病原微生物抗原表位的分析。與其他抗原表位的分析方法相比，它快速、便捷，既可分析線性表位，又可分析構象表位或是與構象表位功能相同的模擬表位。目前，已經鑒定的流感病毒抗原表位多數來源于人源H1N1和H3N2病毒株，而對H5亞型禽流感的抗原表位研究基本處在空白之中，特別是尚未見到國內外有利用噬菌體展示肽庫技術分析H5N1亞型禽流感NS1蛋白抗原表位的相關報道（Akifumi?Yamashita,Norihito?Kawashita,Ritsuko?Kubota-Koketsu,et?al.Highly?conserved?sequences?for?human?neutralization?epitope?on?hemagglutinin?of?influenza?A?viruses?H3N2,H1N1and?H5N1:implicationfor?human?monoclonal?antibody?recognition[J].Biochemical?and?Biophysical?Research?Communications,2010,393:614-618.）。

因此，本發明人開展了NS1抗原表位的鑒定工作，以期能夠為進一步建立高效的檢測禽流感的方法提供理論依據。

發明內容