[發明專利]一種刺激隱核蟲趨化性的測定方法

無效

• 申請號: 201310172165.2
• 申請日: 2013-05-10
• 公開（公告）號: CN103283643A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發明（設計）人: 鄢慶枇;鄒峰;蘇永全;覃映雪;馬英;徐曉津
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 朱凌

技術領域

本發明涉及一種水產養殖領域，特別是涉及一種刺激隱核蟲趨化性的測定方法。?

背景技術

隨著養殖環境的不斷惡化，養殖密度的逐漸提升，由刺激隱核蟲引起的“白點病”對水產養殖海水魚類造成的經濟損失十分巨大。而“白點病”有著感染率高、波及范圍廣、死亡率高等特點，且如今還沒有很好的治療辦法。對刺激隱核蟲的趨化性研究有助于對刺激隱核蟲感染宿主的機制問題的深入探討，進從篩選出驅蟲藥物用于“白點病”的防治。目前國外對魚類寄生蟲趨化性研究有平皿打孔法、96孔板等方法，這些方法存在著操作繁瑣、不便于動態觀察計數等缺陷。國內還沒有專門檢測魚類寄生蟲趨化性的研究方法。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種操作簡便、節約成本的刺激隱核蟲趨化性的測定方法。

為實現上述目的，本發明的技術解決方案是：?

本發明是一種刺激隱核蟲趨化性的測定方法，它包括以下步驟：（1）用干凈載玻片為載體，在載玻片的一側滴加?40-60μl含有刺激隱核蟲幼蟲的海水液滴，在另一側滴加相同體積的測試溶液，海水液滴與測試溶液之間距離為1-2?cm；（2）從海水液滴向測試溶液方向用干凈牙簽輕輕地劃線，使兩側的液滴連通；（3）在溫度25-?28?℃的環境下，靜置20—40分鐘后，在顯微鏡下觀察運動到測試溶液中刺激隱核蟲幼蟲的數量并計算趨化率，趨化率（IC）=移動至含有測試物質一側液滴中幼蟲數目/幼蟲總數×100％。以清潔海水為參照，即測試溶液為清潔海水，測定其趨化率，進而判定測試溶液對刺激隱核蟲幼蟲的趨化作用。

刺激隱核蟲幼蟲對清潔海水的趨化率為3.4%±1.6%，所以刺激隱核蟲幼蟲對測試溶液的趨化率高于5%即認定為有趨化作用，否則認定為沒有趨化作用。?

所述的測試溶液為卵形鯧鲹血清、卵形鯧鲹粘液、果糖溶液、大黃魚血清或谷氨酸溶液中的一種。?

采用上述方案后，由于本發明應用載玻片來檢測刺激隱核蟲的趨化性，比國外習用的平皿打孔法、96孔板法操作簡便。采用載玻片檢測刺激隱核蟲趨化性技術，節約了大量的時間以及試劑、耗材。?

下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。?

具體實施方式

實施例1：在28?℃條件下，取干凈的載玻片，于載波片的一側滴加50?μl刺激隱核蟲幼蟲的蟲液，在另一側滴加50?μl卵形鯧鲹血清，兩側相距2?cm，用干凈牙簽劃線使其形成一個通道。30?min后，顯微鏡下觀察計數，發現移動至含有卵形鯧鲹血清一側的幼蟲數目是35個，而幼蟲的總數是55個，計算得出趨化率為64﹪（即卵形鯧鲹血清對刺激隱核蟲幼蟲有著強烈的趨化作用）。?

實施例2：在26?℃條件下，取干凈的載玻片，于載波片的一側滴加50?μl刺激隱核蟲幼蟲的蟲液，在另一側滴加50?μl的卵形鯧鲹粘液，兩者相距1?cm，用干凈牙簽劃線讓其形成一個通道。30?min后，顯微鏡下觀察計數，發現移動至含有卵形鯧鲹粘液一側的幼蟲數目是21個，而幼蟲的總數是60個，計算得出趨化率為35﹪（即卵形鯧鲹粘液對刺激隱核蟲幼蟲有一定的趨化作用）。?

實施例3：在28?℃條件下，取干凈的載玻片，于載波片的一側滴加40?μl刺激隱核蟲幼蟲的蟲液，在另一側滴加40?μl的果糖溶液，兩側相距2?cm，用干凈牙簽劃線讓其形成一個通道。30?min后，顯微鏡下觀察計數，發現移動至含有果糖溶液一側的幼蟲數目是1個，而幼蟲的總數是50個，計算得出趨化率為2﹪（即果糖溶液對刺激隱核蟲幼蟲沒有趨化作用）。?

實施例4：在25?℃條件下，取干凈的載玻片，于載波片的一側滴加40?μl刺激隱核蟲幼蟲的蟲液，在另一側滴加40?μl的大黃魚血清，兩者相距1?cm，用干凈牙簽劃線讓其形成一個通道。40?min后，顯微鏡下觀察計數，發現移動至含有卵形鯧鲹粘液一側的幼蟲數目是29個，而幼蟲的總數是55個，計算得出趨化率為70﹪（即大黃魚血清對刺激隱核蟲幼蟲有很強烈的趨化作用）。?

實施例5：在25?℃條件下，取干凈的載玻片，于載波片的一側滴加40?μl刺激隱核幼蟲蟲的蟲液，在另一側滴加40?μl谷氨酸溶液，兩側相距1?cm，用干凈牙簽劃線使其形成一個通道。40?min后，顯微鏡下觀察計數，發現移動至含有谷氨酸溶液一側的幼蟲數目是3個，而幼蟲的總數是97個，計算得出趨化率為3﹪（即谷氨酸溶液對刺激隱核蟲幼蟲沒有趨化作用）。?

通過以上五個實施例可以發現，各種海水魚類（甚至一些淡水魚類）的血清與粘液對刺激隱核蟲都有著趨化作用，而一些小分子物質（糖類、氨基酸等）對刺激隱核蟲無趨化作用。?