[發明專利]一種雞傳染性法氏囊病活疫苗及其生產方法

有效

• 申請號: 201310169187.3
• 申請日: 2013-05-09
• 公開（公告）號: CN103263667A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 蔣桃珍;陳光華;孫曄
• 申請（專利權）人: 北京中海生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/42
• 分類號: A61K39/42;A61K39/12;A61K9/19;A61P31/14
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種雞傳染性法氏囊病活疫苗及其生產方法。屬于獸用生物制品領域。?

背景技術

雞傳染性法氏囊病是由雙股RNA病毒引起的雛雞的一種急性、高度傳染性、殺淋巴細胞性疾病,是世界各地危害養雞業最嚴重的傳染病之一，預防此病的主要措施是采用疫苗進行免疫接種。由于母源抗體對活疫苗的干擾較大，因此，必須根據母源抗體水平確定初免時間，以確保疫苗的免疫效果在實際生產中，由于同一雞群中其不同個體母源抗體水平也存在較大差異，最適免疫時間不易確定，一旦免疫時間不當，野毒常常趁虛而入，導致發病。近年來，IBD疫苗研究方興未艾，許多新型疫苗也相繼研究成功，其中包括基因工程亞單位疫苗、重組活載體疫苗等。本研究發明的雞傳染性法氏囊病活疫苗利用IBDV與一定量的豬抗IBDV高免血清特異結合，可延遲疫苗病毒在雞體內的復制。其免疫機理是，當雞體母源抗體降低到一定水平，病毒開始復制釋放，產生主動免疫保護力，且誘導的免疫反應比常規活疫苗強。由于該疫苗受母源抗體干擾很小，采用18日齡雞胚胚內接種或1日齡雛雞頸部皮下接種即可產生良好免疫保護，避免雞群早期感染。本發明采用豬抗IBDV高免血清為制苗材料，避免了采用雞血清而導致的禽外源病毒污染，疫苗更加安全。?

發明內容

本發明目的在于利用免疫原性好的IBDVCF-C株與豬抗IBDV高免血清特異結合制備疫苗，采用18日齡雞胚實施胚內接種或對1日齡雛雞進行頸部皮下接種，一次免疫即可產生良好的免疫保護力。此外疫苗以豬抗IBDV高免血清為制苗材料，避免了采用雞血清而導致禽外源病毒污染，制備的疫苗更加安全。?

技術路線?

1.本發明所涉及的一種雞傳染性法氏囊病活疫苗是含雞傳染性法氏囊病病毒CF-C株和豬抗IBDV高免血清的活疫苗，其中雞傳染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus）CF-C株病毒已于2013年4月1日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?No.7404。?

2.本發明涉及的雞傳染性法氏囊病活疫苗的制備方法為：?

（1）雞胚的接種、收獲：用滅菌生理鹽水/或磷酸鹽緩沖肉湯將生產用毒種CF-C株雞傳染性法氏囊病病毒稀釋至含1000～10000EID₅₀/0.1ml，將稀釋后的CF-C株病毒液經絨毛尿囊膜接種10～11日齡SPF雞胚，每胚0.1ml，置37℃孵育至96小時，棄去48小時前死胚；分別分組收取48～96小時死胚及96小時存活胚胎兒及尿囊膜，裝于無菌容器內剪碎，置-20℃以下凍存；凍融2～3次后經離心或過濾去掉沉渣，上清為制苗用CF-C株半成品，經過無菌檢驗合格的、病毒含量為每0.2ml≧10^4.5ELD₅₀，保存于-20℃以下；?

（2）豬抗IBDV高免血清的制備：?

用CF-C株雞傳染性法氏囊病病毒免疫健康豬獲得豬抗IBDV高免血清，56℃滅活30min,保存于-20℃以下。?

（3）配苗及分裝配苗及分裝取經過檢驗合格的并經滅菌生理鹽水/或磷酸鹽緩沖肉湯稀釋至病毒含量為每0.2ml≧10^4.5ELD₅₀的病毒液按體積比1:1與豬抗IBDV高免血清混合，加入常用凍干保護劑和抗生素經充分混勻，定量分裝，分裝后迅速進行冷凍真空干燥。?

本發明的實施方式?

1．病毒株來源及特征?

（1）毒株來源：雞傳染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV）CF95株來自中國獸醫藥品監察所，由中國獸醫藥品監察所于1995年在北京市分離鑒定并經過人工多次傳代致弱，此后本發明人通過終點稀釋法得到較高病毒滴度的克隆株，命名為雞傳染性法氏囊病病毒（Infectiousbursaldiseasevirus）CF-C株，該株病毒已于2013年4月1日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號CF-C株為CGMCCNo.7404。?

1）分離在北京市某疑似雞傳染性法氏囊病感染的雞場中采集病死雞病變法氏囊，經抗生素除菌處理后，接種雞胚，連續傳代，增殖分離病毒，經鑒定為IBDV強毒株，對SPF雞的法氏囊半數感染量為10^4.0BID₅₀/0.1ml，命名為CF95株.?