[發(fā)明專利]細胞培養(yǎng)改良

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310168020.5
• 申請日: 2007-09-13
• 公開（公告）號: CN103276033A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: I.A.布拉;J.C.馬杜克;J.C.范;C.史丘茲;N.A.洛依;D.F.布魯頓;J.麥因泰爾;張幼翔;T.希沃斯特
• 申請（專利權(quán)）人: 雅培制藥有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12Q1/02;C12Q1/54
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權(quán)陸軍

1.一種用于在哺乳動物細胞培養(yǎng)物中生產(chǎn)蛋白的方法，其包含：

a)在細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中培養(yǎng)包含編碼該蛋白的核酸的哺乳動物細胞；及

b)使用反饋控制系統(tǒng)監(jiān)控所述細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中的代謝指示劑水平，藉此將組合補料溶液添加至所述細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中，其中在該反饋控制系統(tǒng)所測定的時間點將所述組合補料溶液添加至所述細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中，

以產(chǎn)生該抗體。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述哺乳動物細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。

3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述代謝指示劑為葡萄糖或谷氨酰胺。

4.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述補料溶液為包含下列的組合補料溶液：葡萄糖；基礎(chǔ)細胞培養(yǎng)基；除谷氨酰胺以外的氨基酸；及至少兩種不同的非動物源水解產(chǎn)物。

5.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述蛋白為抗體。

6.權(quán)利要求5的方法，其中所述抗體選自抗-TNFα抗體、抗-IL-12抗體、抗-IL-18抗體和抗-EPO受體(EPO-R)抗體。

7.權(quán)利要求5或6的方法，其中以至少1.5g/L的滴度生產(chǎn)所述抗體。

8.權(quán)利要求5或6的方法，其中以至少2g/L的滴度生產(chǎn)所述抗體。

9.權(quán)利要求4的方法，其中所述組合補料溶液包含約3.0至12.5g/kg天冬酰胺。

10.權(quán)利要求4的方法，其中所述至少兩種不同的非動物源水解產(chǎn)物包含植物源水解產(chǎn)物和非動物源或植物源的水解產(chǎn)物。

11.權(quán)利要求10的方法，其中所述非動物源或植物源的水解產(chǎn)物為酵母源水解產(chǎn)物。

12.權(quán)利要求10的方法，其中所述植物源水解產(chǎn)物為大豆源水解產(chǎn)物。

13.權(quán)利要求4的方法，其中所述組合補料溶液包含約100至200g/kg葡萄糖。

14.權(quán)利要求4的方法，其進一步包含監(jiān)控所述細胞培養(yǎng)基中的葡萄糖水平，從而將所述葡萄糖水平維持在約0.25與20.0g/L之間。

15.權(quán)利要求14的方法，其中用自動取樣裝置監(jiān)控所述葡萄糖水平。

16.權(quán)利要求6的方法，其中所述抗-TNFα抗體為D2E7(阿達木單抗)。

17.權(quán)利要求6的方法，其中所述抗-IL-18抗體為ABT-325。

18.權(quán)利要求6的方法，其中所述抗-IL-12抗體為ABT-874。

19.一種測定在哺乳動物細胞培養(yǎng)物中生產(chǎn)蛋白的補料曲線的方法，其包含：

a)在細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中培養(yǎng)包含編碼該抗體的核酸的哺乳動物細胞；及

b)使用反饋控制系統(tǒng)監(jiān)控所述細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中的代謝指示劑，藉此將組合補料溶液添加至所述細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中，其中將所述組合補料溶液添加至所述細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中以達到目標代謝指示劑設(shè)定點；及

c)測定每天添加至所述細胞培養(yǎng)生產(chǎn)培養(yǎng)基中的組合補料溶液的量，

以測定補料曲線。

20.權(quán)利要求19的方法，其中所述代謝指示劑為葡萄糖或谷氨酰胺。

21.一種用于在哺乳動物細胞培養(yǎng)物中生產(chǎn)蛋白的分批補料方法，其包含根據(jù)權(quán)利要求19的補料曲線將組合補料溶液添加至所述哺乳動物細胞培養(yǎng)物中。