[發明專利]急性白血病病理演變前期Evi-1mRNA原位雜交檢測試劑盒及檢測方法和應用

無效

• 申請號: 201310167925.0
• 申請日: 2013-05-09
• 公開（公告）號: CN104141001A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 張云福;裘建英;裘霖;張玉麗
• 申請（專利權）人: 嘉興瑞康生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，更具體地說，是涉及急性白血病病理演變RNA表達改變(病理演變過程)的相關檢測技術。?

背景技術

研究人員發現了導致急性白血病復發的一個基因，如果能找到抑制該基因發揮作用的方法，就有可能防止急性白血病的復發。急性白血病患者中有70％到80％的人都會復發。其原因是數量極少的白血病干細胞反復分裂，使白血病細胞大量增殖。抗癌藥物雖然能夠殺滅白血病細胞，但難以殺滅其中的白血病干細胞，造成急性白血病屢治屢發。研究證實急性白血病復發患者體內的基因“Evi-1”在造血干細胞中非常活躍，這一基因作用于白血病干細胞，使其不斷分裂，導致白血病細胞大量增殖。研究人員從患白血病的實驗鼠體內取出白血病細胞，去除了“Evi-1”基因后再移植到10只健康實驗鼠體內。研究小組還給另外10只健康實驗鼠完整移植了白血病細胞(含“Evi-1”)。結果發現，前一組實驗鼠比后一組實驗鼠平均晚發病一個月；而在殺滅兩組實驗鼠體內的白血病細胞后，前一組實驗鼠沒有復發急性白血病，后一組卻再次發病。研究人員認為，對照實驗已經說明，“Evi-1”對急性白血病的發作和復發有推動作用，而這與它作用于白血病干細胞有直接關系。本發明人在實驗研究中對急性白血病患者的外周血白細胞進行檢測，發現Evi-1基因過度表達，表明Evi-1基因是急性白血病干細胞的轉移源頭，檢測Evi-1基因能預測急性白血病患者復發的可能，檢測Evi-1基因就可能預測急性白血病復發幾率。?

隨著分子生物技術日益完善，功能基因組學，癌癥基因組學等研究的深入展開，為了尋求更早期的診斷癌癥、治療癌癥、以及預防癌癥，已取得長足進步。至今，我們已有可能在基因的一級轉錄功?能產物(mRNA水平或microRNA)上做更精確的早期篩查和診斷，在急性白血醫治后的早期就可以預測復發的風險。?

本發明采用核酸原位雜交技術和免疫組化方法對Evi-1急性白血病復發的早期預警進行檢測分析。?

本發明人在研究中發現Evi-1作為急性白血病復發的預警有非常重要的臨床診斷意義。Evi-1在急性白血病復發前期有高表達。他作于急性白血病復發前期的篩查有非常重要的臨床意義。?

發明人在長期的研究中，得出了一種新理念，癌癥和其它臨床的重大疾病的臨床診治模式一定要改變，不能只停留現在治已病(發病后診治)，要做到預防性診治，做到治已病，只有這樣才能降低重大疾病的發病率和死亡率，降低社會成本和醫療成本。因此，發明人在開發和生產重大疾病的RNA水平篩查試劑盒及治療藥物中，在理論和技術上都做了創新。特別是篩選臨床標本(正常人群、癌癥高危人群、腫瘤患者)，突破了正常組織與腫瘤組織比較的一貫性研發思路，來尋找和開發癌前變的RNA水平，與癌癥早期基因病理生理學演變密切相關，而且臨床意義非常重要靶標，將臨床上腫瘤形成后診治模式變成腫瘤的預防性診治，其中包括急性白血病及急性白血病復發的早期預測，爭取了腫瘤診治的時間和空間，達到預防占位性癌癥和急性白血病。?

目前，Evi-1表達譜檢測方法用Northern雜交、表達芯片、實時熒光定量PCR和Solexa測序等分析技術，而這些方法多用于科研方面，不適應臨床應用，而檢測RNA比基因分析更科學(DNA分析大部分在易感性的表象上，RNA是功能性體現)，比蛋白分析更可靠(RNA與蛋白轉錄有時候不同步)。根據現有的文獻資料采用原位雜交技術和組化免疫方法檢測Evi-1mRNA水平表達量的檢測技術及試劑盒未見報道。?

本發明人在針對創新性發明的要求，用原位雜交技術進行檢測，結果表明急性白血病患者經治療后Evi-1高表達，病患存在高度復發風險，應為患者的白血病干細胞在造血系統中大量存在，表明Evi-1可用為急性白血病復發前期篩查的重要標志物。?

原位雜交技術(in?situ?hybridization)是將分子生物學與?細胞化學技術結合起來，以標記的核酸分子為探針，在組織細胞原位檢測特異性核酸分子的技術。其原理是使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈(即探針)，在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交，再以放射自顯影或免疫細胞化學方法對標記探針進行探測，從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。?