[發(fā)明專利]利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310167893.4 | 申請(qǐng)日： | 2013-05-09 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103210791A | 公開（公告）日： | 2013-07-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王謙;劉苗;顧峰;劉敏 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 河北大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A01G1/04 | 分類號(hào)： | A01G1/04;A01H4/00 |
| 代理公司： | 石家莊匯科專利商標(biāo)事務(wù)所 13115 | 代理人： | 王琪 |
| 地址： | 071002 *** | 國(guó)省代碼： | 河北;13 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 利用 木屑 栽培 側(cè)耳 方法 | ||
1.一種利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征包括如下步驟：
A、篩選具有柿木屑分解優(yōu)勢(shì)的金頂側(cè)耳株：
A-1、金頂側(cè)耳種紫外誘變：
A-2、誘變株的初篩：以78%致死率的時(shí)間作為照射劑量誘變金頂側(cè)耳原生質(zhì)體，待原生質(zhì)體在柿木屑分解優(yōu)勢(shì)菌株再生平皿已再生出菌落后，取優(yōu)先再生出來、菌落直徑最大、生長(zhǎng)最旺盛的菌落進(jìn)入復(fù)篩階段；
初篩培養(yǎng)基：柿木屑粉40g/L、麩皮10g/L、KH2PO41g/L、MgSO4·7H2O1g/L、pH值6.0、瓊脂20g/L，麩皮煮沸30min，過濾去渣取浸提液，柿木屑粉碎過80目篩得粉狀，直接加入培養(yǎng)基，常規(guī)滅菌；
A-3、誘變株的復(fù)篩：將初篩選出來的菌株每株接10支PDA斜面培養(yǎng)基至菌絲長(zhǎng)滿斜面，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速率，從中選出長(zhǎng)速快、長(zhǎng)勢(shì)好的菌株進(jìn)入精篩；
A-4、誘變株的精篩：將復(fù)篩出來的菌株每株接入10支栽培料培養(yǎng)基試管上進(jìn)行培養(yǎng)，栽培料培養(yǎng)基：柿木屑60%、啤酒糟20%、柿樹葉10%、麩皮8%、生石灰2%，加入水或水溶液，料水比為1:1.4進(jìn)行拌料，121℃下高壓滅菌150min；取長(zhǎng)速快、長(zhǎng)勢(shì)好的菌株;
B、菌種擴(kuò)繁
B-1、液體培養(yǎng)
取栽培時(shí)所用相同的啤酒糟3%，加入去皮馬鈴薯12%、麩皮1%共煮沸30min，過濾去渣即得培養(yǎng)基浸煮液，再加入KH2PO41g/L、MgSO4·7H2O1g/L、pH值6.0、瓊脂3g/L，柿木屑添加量為10%，粉碎過80目篩后直接加入培養(yǎng)基中，即得發(fā)酵培養(yǎng)液，培養(yǎng)液分裝完畢后，瓶口包扎四層棉布，棉布外加蓋兩層報(bào)紙，進(jìn)行高壓滅菌，121℃、0.1-0.15MPa滅菌30min；
將滅過菌的液體培養(yǎng)基中放入接種箱中，表面紫外或甲醛熏蒸滅菌后進(jìn)行接種，每瓶接精篩保存的PDA斜面菌種1cm2大小菌塊四塊，靜置24h后放入轉(zhuǎn)速為160r/min、溫度為25℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)96h，生物量達(dá)到25g/100mL以上，鏡檢合格后使用；
B-2、麥粒菌種擴(kuò)種：培養(yǎng)基為麥粒79%、柿木屑20%、生石灰1%。將麥粒用自來水浸泡10h后，煮沸至麥粒掰開無白芯為止，濾去水分，攤開晾干，加入柿木屑、生石灰攪拌均勻，pH值自然，用500mL的細(xì)口瓶或雙層聚丙烯塑料袋裝至瓶/袋肩，0.10-0.15MPa滅菌2.5h；避光培養(yǎng)至滿瓶/袋后7-15天即可在金頂側(cè)耳栽培過程中應(yīng)用；
C、金頂側(cè)耳栽培：取步驟A-4的栽培料培養(yǎng)基，裝入17cm×32cm×0.05cm聚乙烯塑料袋，每袋裝干料300g，121°C高壓滅菌150min，冷卻后，按照5-10%的接種量接入；
20℃避光培養(yǎng)至滿袋后，敞開袋口進(jìn)行生殖生長(zhǎng)管理階段，此階段保持溫度15-20℃，空氣濕度85-95%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征步驟A-1所述金頂側(cè)耳種紫外誘變包括：
1）菌絲體制備：培養(yǎng)基配方為去皮馬鈴薯20%、麩皮2%、KH2PO41g/L、MgSO4·7H2O1g/L、pH值6.0、瓊脂0.3%。培養(yǎng)條件為160r/min、溫度為25℃恒溫?fù)u床培養(yǎng)7天，
2）原生質(zhì)體制備：
2-1）將已培養(yǎng)好的菌絲置于離心管中6000r/min離心10min，去上清液，用濃度為109g/L甘露醇滲透壓穩(wěn)定劑洗三次，按每300mg濕菌絲加1mL酶解液酶解，酶解溫度為30℃，酶解時(shí)間為150min；
酶解液是含有6g/L纖維素酶和6g/L蝸牛酶的混合酶的109g/L甘露醇溶液；
2-2）稀釋：用濃度為109g/L甘露醇溶液稀釋原生質(zhì)體懸浮液至濃度為105個(gè)/mL；
3）紫外誘變：紫外燈15W，照射距離30cm，照射劑量30s。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征在于步驟A-2、A-4、B-1所述柿木屑是柿木枝條粉碎，過80目篩得到的木屑粉；步驟B-2、C栽培用途下所述柿木屑，是柿木枝條粉碎成木屑樣粉片。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用柿木屑栽培金頂側(cè)耳的方法，其特征在于步驟A-4所述加入培養(yǎng)料的水溶液為柿樹樹葉浸提液，浸提方法是將自然風(fēng)干的柿樹樹葉浸泡10h后，加熱煮沸30min，料水配比為6g/100mL(w/v)，冷卻過濾后裝入試管中，121℃下高壓滅菌150min備用。
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