[發明專利]一種利用膠體金免疫層析技術定量檢測血清胃蛋白酶原的試紙條及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310166881.X
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號: CN104142399A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 金鑫;曾濱
• 申請（專利權）人: 北京美康生物技術研究中心有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N33/558
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

技術領域

本發明涉及一種篩查胃部疾病的試劑，尤其涉及一種利用膠體金免疫層析技術并通過定量檢測人血清胃蛋白酶原I及胃蛋白酶原II的含量來篩查及療效評估的胃相關疾病及早期胃癌的試紙條，屬于胃病或早期胃癌的快速篩查及療效評估領域。?

背景技術

胃癌是全球高危死亡率的第二大疾病，嚴重威脅著人類健康。胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，死亡率居各種惡性腫瘤前列，全球每年934,000新發胃癌病例，42%（近40萬）的新發病例數在我國，胃癌在我國的患病率和死亡率均是世界水平的2倍多。其早期診斷、早期治療是提高患者生存質量、降低死亡率的唯一途徑，改善胃癌患者預后的關鍵是作好二級預防，血清胃蛋白酶原檢測可以作為胃癌篩查“二步法”中的初篩方法。聯合測定胃蛋白酶原I（PGＩ）和胃蛋白酶原II（PGⅡ）的水平及其比值可起到胃黏膜“血清學活檢”的作用，有利于胃癌的預防干預、早期診斷以及術后復發預測。近年來，血清PG含量的變化與胃癌及其他胃部疾病的關系及其作為初篩手段在胃癌篩查中的應用已引起越來越多研究者的關注。?

人胃黏膜可分泌兩種胃蛋白酶原（PG），即PGⅠ和PGⅡ，它們都是胃蛋白酶的前體。通常情況下，大部分進入胃腔內，在酸性條件下水解為胃蛋白酶參與蛋白的分解；約有1%PG通過胃粘膜毛細管進入血循環，進入血循環的PG在血液中非常穩定，血清PG水平可反映不同部位胃粘膜的形態和功能。血清PGI和PGII檢測在胃部疾病或早期胃癌的篩查、胃部疾病療效的評價及健康人群胃功能動態檢測方面都具有重要意義。?

目前臨床胃部疾病及胃癌的檢測方法主要包括內窺鏡、B超、放射學檢測（X線）、腫瘤標志物等。X線作為傳統的胃癌檢測手段，對進展期胃癌或彌散型胃癌更有診斷價值，但此法存在射線暴露，檢查費用較高等問題，因而對早期胃癌的判定顯得無能為力；內窺鏡費用較高，對操作人員的技術要求高，而且下胃鏡又令患者很痛苦，結果使不少患者望而卻步，對亞臨床癥狀患者尚不能作為普查手段；與胃?癌有關的腫瘤標志物對于普通胃病及早期胃癌的診斷價值不大。?

相比與其他胃部檢測手段，血清PGI/PGII聯合檢測具有無創傷、簡便、可靠和費用低廉等優點，目前已建立多種檢測方法，如酶聯免疫法、化學發光法、免疫比濁法、時間分辨等，并且已在醫院和體檢中心廣泛使用，但是往往需要昂貴的儀器和試劑，或檢測結果不能立等可取以及不適于單人份測試。?

免疫金標記技術（Immunogold?labeling?technique）是出現于80年代初期的一種獨特的免疫分析方式，主要利用了金顆粒具有高電子密度的特征，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這種方法由于快速、簡便、準確和無污染等優點，在檢測抗原、抗體中得到廣泛使用。?

目前，在國內銷售的免疫金標記技術的產品已有很多，但利用此檢測方法定量檢測血清胃蛋白酶原的產品尚屬空白。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題之一是克服常規胃蛋白酶原檢測方法不適合單人份測試、檢測時間較長、檢測成本高等缺點，提供一種快速、簡便、準確、價格低廉的定量檢測PG的方法。?

該方法所基于的免疫學原理是雙抗體夾心法。樣品加入樣品吸收墊，樣品中的液體首先溶解膠體金墊中含有的膠體金標記的鼠源性單克隆抗體。其次樣品中待測抗原（PG）與膠體金顆粒標記的鼠源性單克隆抗體結合，形成抗原-抗體*膠體金復合物，并靠毛細作用向檢測線移動。在硝酸纖維薄膜的檢測線上固定有另一鼠源性單克隆二抗。當樣品層析至檢測線時，可以進一步形成抗體-抗原-抗體*膠體金雙抗體夾心復合物，并在檢測線（T線）上聚積顯現出一條可見的顯色反應。膠體金的量反應了待測抗原的量。從加樣墊中泳動過來的過量膠體金標記的單克隆抗體，均可被固定于標準的胃蛋白酶原抗原（質控線，C線）所捕獲，形成顯色反應，這種顯色反應，既代表了整個反應體系是正確的，同時T線顯色反應的深淺，與檢測區中被測抗原的量呈對應關系。膠體金顆粒在特定波長下，對光的吸收和散射與膠體金顆粒的量相關，通過光電感應器檢測膠體金顆粒對光的吸收和散射，它與樣本中的胃蛋白酶原的含量呈正比。?

為了達到以上所述的目的，本發明所采用的技術手段為：?