[發明專利]一種細胞培養微流控芯片及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310166674.4
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號: CN103255057A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發明（設計）人: 陳斯佳;蔡紹皙;張利光;鄒米莎;趙毅;何騰龍;陳龍聰;李博;柯明
• 申請（專利權）人: 重慶大學
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12N5/00
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所 11308
• 代理人: 周維鋒

1.用于細胞培養的微流控芯片，其特征在于，包括細胞培養層(1)、基底層(2)和夾持層(3)，所述細胞培養層(1)和夾持層(3)之間三邊密封成夾套結構，所述基底層(2)以可取出的方式插接在夾套結構中，基底層(2)與細胞培養層(1)之間的接觸面密封，所述細胞培養層(1)上分布設置有至少2個孔，孔與基底層(2)共同形成細胞培養小室(4)。?

2.根據權利要求1所述的用于細胞培養的微流控芯片，其特征在于：所述夾持層(3)設有觀測孔(5)。?

3.根據權利要求1所述的用于細胞培養的微流控芯片，其特征在于：細胞培養小室(4)填充有凝膠，每個細胞培養小室(4)通過凝膠貫通。?

4.根據權利要求1所述的用于細胞培養的微流控芯片：所述微流控芯片為透明材質制成，長3-5cm，寬1-3cm，高0.4-1cm，設有3-6個細胞培養小室(4)。?

5.權利要求4所述的細胞培養微流控芯片的制備方法，其特征在于，所述微流控芯片的制備材料僅用玻片和PDMS，包括如下進行的步驟：?

a排布玻片?

在玻璃容器(6)中放置5片直徑為18mm的圓形玻片(7)，將1片長60mm×寬24mm的長方形蓋玻片(8)覆蓋在圓形蓋玻片上面，然后將7片10mm×10mm的方形蓋玻片(9)放置在長方形蓋玻片(8)的上面相對于圓形蓋玻片(7)的中間，在方形蓋玻片(9)的一個邊或多個邊旁邊相對中間的位置分別緊靠放置5片8mm×8mm的方形蓋玻片(10)；?

b?PDMS預聚液的配制?

PDMS主劑與固化劑按10∶1的質量比混合并充分攪拌混勻，制成PDMS預聚液；?

c倒模?

將PDMS預聚液小心注入步驟a中已排布好玻片的玻璃容器中，厚度在0.4-1cm，然后放于80℃烘箱中固化24h；?

d微流控芯片成形?

待步驟c中PDMS充分固化后，將其從玻璃容器中剝離下來，切割邊緣部分成型，將底部的所有玻片取出，用打孔器在芯片上側和下側分別打孔；?

e封裝?

將一張玻片插入步驟d中長方形玻片的位置即形成基底層，完成對芯片的封裝。?

6.基于權利要求1-5任一項所述的微流控芯片的細胞培養方法。?

7.根據權利要求6所述的細胞培養方法，其特征在于，細胞二維培養的方法為：將膠原或基質膠灌入細胞培養小室(4)中，待成膠后，直接將細胞懸液再加入細胞培養小室(4)中，進行二維培養。

8.根據權利要求6所述的細胞培養方法，其特征在于，細胞三維培養的方法為：細胞與膠原或基質膠混合后灌入細胞培養小室(4)中，待成膠后，再向細胞培養小室(4)中加入培養基進行培養。

9.根據權利要求6所述的細胞培養方法，其特征在于，細胞貼壁三維培養的方法為：膠原或者基質膠混合后灌入一個細胞培養小室(4)中，待成膠后，直接將細胞懸液加入到另外的任一個細胞培養小室中，豎直放置30min，在上述加入細胞懸液的細胞培養小室中加入培養基后進行培養。

10.根據權利要求6所述的細胞培養方法，其特征在于，多種細胞的三維共培養的方法為：將細胞A與膠原或者基質膠混合后灌入一個細胞培養小室(4)中，待成膠后，加入培養基后孵育30min，細胞B與膠原或基質膠混合后灌入另外的任一個或多個細胞培養小室，成膠后，在上述加入細胞B的細胞培養小室中加入培養基進行培養。?