[發明專利]一種鴨瘟活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201310165572.0
• 申請日: 2013-05-08
• 公開（公告）號: CN103224913A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 楊承槐;李俊平;李啟紅;張廣川;劉丹;李嶺;毛婭卿;李慧姣;夏業才
• 申請（專利權）人: 中國獸醫藥品監察所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種鴨瘟活疫苗及其制備方法，屬獸用生物制品領域。

背景技術

鴨瘟（duck?plague），也稱為鴨病毒性腸炎（duck?virus?enteritis），是由鴨腸炎病毒（duck?enteritis?virus）或稱鴨瘟病毒（duck?plague?virus）或稱鴨瘟皰疹病毒（duck?plague?herpesvirus）引起的鴨、鵝等雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性的傳染病，其特征是血管損傷、組織出血、消化道粘膜糜爛、淋巴器官出現病變、實質器官退行性病變（Saif?Y?M.禽病學(第11版).高福,蘇敬良譯.北京:中國農業出版社,2005：389-398）。1923年荷蘭首次報道了該病（Baudet,A.E.R.F.1923.Mortality?in?ducks?in?the?Netherlands?caused?by?a?filterable?virus.Fowl?plague.Tijdschr?Diergeneeskd?50:455–459.）。1957年，黃引賢在我國最早報道該病并分離到病毒（黃引賢.擬鴨瘟的研究.華南農學院學報.1959,1:67-78.）。該病發病率和死亡率很高，對水禽養殖業危害很大。目前預防鴨瘟的主要措施為疫苗免疫接種。常用的疫苗有滅活疫苗和活疫苗。鴨瘟滅活疫苗是由鴨瘟病毒鴨胚適應毒滅活后加油佐劑乳化而成。鴨瘟活疫苗是由鴨瘟病毒雞胚化弱毒培養物，加適宜穩定劑，經冷凍真空干燥而成（中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二〇一〇年版（三部）.中國農業出版社，2011，本發明以下簡稱《獸藥典》）。鴨瘟病毒雞胚化弱毒是鴨瘟病毒經過鴨胚連續傳代10代后，再經雞胚傳代60多代致弱，對鴨的致病力減弱。該病毒的全基因組約為158091bp（GenBank?No.EU082088）。

本發明使用的原始種毒為中國獸醫微生物菌種保藏管理中心（CVCC）保存的鴨瘟皰疹病毒強毒CVCC?AV1221株，全基因組為162131bp（GenBank?No.JQ673560），與鴨瘟病毒雞胚化弱毒相比，存在兩個額外的大片段（3513bp和528bp）。

注：本發明所涉及的鴨瘟（duck?plague），也稱為鴨病毒性腸炎（duck?virus?enteritis），其病原為鴨腸炎病毒（duck?enteritis?virus）/或稱鴨瘟病毒（duck?plague?virus）/或稱鴨瘟皰疹病毒（duck?plague?herpesvirus）。

發明內容

本發明的目的是培育一株免疫原性和安全性都好的鴨腸炎病毒（duck?enteritis?virus）弱毒病毒株，并用此弱毒株病毒作為鴨瘟活疫苗的生產毒種，制備出一種鴨瘟活疫苗提供鴨瘟防疫使用。

本發明的技術方案

1.一株鴨腸炎病毒（duck?enteritis?virus）是一株弱毒株，該株病毒已于2013年04月26日送交北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號CGMCC?No.7460。

2.該鴨腸炎病毒CGMCC?No.7460是鴨瘟皰疹病毒強毒株CVCC?AV1221經雞胚成纖維細胞連續傳代、克隆純化得到的弱毒株病毒；CGMCC?No.7460毒株全基因組為160330bp，與鴨瘟皰疹病毒強毒CVCC?AV1221株基因組（GenBank?No.JQ673560）相比，缺失了145818-147618位的核苷酸共1801bp。

3.一種鴨瘟疫苗主要含有鴨腸炎病毒CGMCC?No.7460株，其制備方法主要為：將鴨腸炎病毒CGMCC?No.7460株接種于SPF雞胚制備的CEF單層細胞，培養至當病變率達75％以上收獲病毒培養物，加常規凍干穩定劑，混勻后再經冷凍真空干燥制成鴨瘟活疫苗。

給鴨接種有效劑量的疫苗，能使接種的鴨獲得對鴨瘟皰疹病毒強毒株有效的免疫力。

4.該鴨腸炎病毒CGMCCNo.7460株的基因組145818-147618位缺失區域按常規生物學技術插入不同的水禽病毒的保護性抗原基因片段構建成相應的重組病毒，分別用于制備活載體疫苗，同時預防鴨瘟和相應的水禽疾病。

本發明具體方式

1.生產種毒

1.1原始種毒來源