[發明專利]一種喹啉酮生物堿的制備方法與作為環境友好型海洋生物防污劑的應用

有效

• 申請號: 201310165301.5
• 申請日: 2013-04-19
• 公開（公告）號: CN103408490A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 王長云;邵長倫;陳敏
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C07D215/22
• 分類號: C07D215/22;A01N43/42;A01P17/00;C09D5/16;C12P17/12;C12R1/66
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技術領域

本發明涉及一種具有抑制藤壺幼蟲附著活性的喹啉酮生物堿的制備方法與作為環境友好型海洋生物防污劑的應用。

背景技術

海洋生物污損是指海洋污損生物如藤壺、貽貝、苔蘚蟲等的幼蟲在船體、魚箱、油井等海洋設施或其它海洋生物表面附著生長而形成群落，從而對被附著物造成巨大損害，如加速金屬腐蝕、降低海洋設施性能、影響水產養殖業產量和質量等。在海洋污損生物中，藤壺是分布最廣、危害最大的一類。全世界每年由于海洋生物污損導致的經濟損失巨大。以船舶為例，污損生物在船底附著，使船舶燃料消耗增加40％，航行代價高達77％，為此全球航運每年損失約30億美元。目前使用的防污損材料主要是在船體等設施表面涂布含有殺蟲劑或有機金屬的有機涂料。這些防污損材料在發揮防污損作用的同時也嚴重破壞了海洋環境，如有機錫氧化物(TBTO)使許多魚類和海洋生物的免疫系統遭到破壞，而殺蟲劑對目標污損生物和非目標生物都產生毒害，并直接危害人類健康。因此，尋找對環境友好的高效、低毒的天然海洋生物防污劑已成為各國面臨的重大課題。海洋高鹽、高壓、低光照等特殊條件使海洋微生物能夠產生大量結構新穎、活性獨特的次級代謝產物，其中有些化合物具有防污損活性，為尋找潛在的天然海洋生物防污劑提供了重要來源。目前，尚未見到從海洋微生物中獲得有重要應用價值的海洋生物防污劑。

發明內容

本發明的目的在于提供一種來源于海洋真菌的喹啉酮生物堿的制備方法與作為環境友好型海洋生物防污劑的應用，它能滿足現有技術的上述需求。菌種保藏信息：保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；保藏單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所；保藏日期：2013年3月1日；保藏編號：CGMCC7269；分類命名：曲霉Aspergillus?sp.。

一種喹啉酮生物堿aflaquinolone?D，其結構式為

上述喹啉酮生物堿化合物的制備方法，其特征在于先在菌種培養基中對海洋真菌Aspergillus?sp.(HM991281)進行菌種培養，再在發酵培養基中對真菌進行發酵培養，將所得發酵液過濾，除去菌體，將濾液濃縮，用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮后進行色譜分離，將所得洗脫液濃縮后獲得一種無色油狀物，即為aflaquinolone?D。

本發明提供一種海洋生物防污劑，其特征在于以上述喹啉酮生物堿化合物作為有效成分，用于防治藤壺Balanus?amphitrite幼蟲附著引起的海洋生物污損。本發明的喹啉酮生物堿化合物對藤壺B.amphitrite幼蟲附著具有強抑制作用，而且毒性較小，可用于開發環境友好型海洋生物防污劑，并且原料可以通過真菌發酵進行大規模生產，不受資源限制，因此應用前景廣闊。

具體實施方式

本發明的化合物的制備

(1)真菌Aspergillus?sp.(HM991281)的菌種培養所用的菌種培養基含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、瓊脂1.0％、粗海鹽3％，其余為水，使用時制成試管斜面，真菌菌株在28℃下培養5天。

所述的菌種培養基含有葡萄糖0.1％-5.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-2％、蛋白胨0.01％-2％、瓊脂0.1％-3.0％、粗海鹽0.05％-5％，其余為水；培養溫度為5-45℃；培養時間為3-10天。

(2)真菌Aspergillus?sp.(HM991281)的發酵培養所用的發酵培養基為含有葡萄糖1.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.1％、蛋白胨0.2％、粗海鹽3.0％，其余為水；真菌菌株于25℃培養30天。

所述的發酵培養基含有葡萄糖0.1％-5.0％(重量百分比，下同)、酵母膏0.01％-2％、蛋白胨0.01％-2％、粗海鹽0.05％-5％，其余為水；培養溫度為5-45℃；培養時間為10-50天。

(3)本發明的化合物的提取分離

將所得40L發酵液過濾除去菌體后，用乙酸乙酯萃取3次，將所得萃取液濃縮后得到粗浸膏，繼而進行色譜分離，洗脫液經濃縮后獲得一種無色油狀物，即為aflaquinolone?D

所述的色譜分離為正相硅膠柱色譜分離，采用的固定相為200～300目硅膠，流動相為30％-60％的乙酸乙酯-石油醚混合溶劑。

所得化合物的波譜數據