[發明專利]具有Tumstatin活性的重組蛋白Tumstatin-CD137L4及其制備和應用

有效

• 申請號: 201310163407.1
• 申請日: 2013-05-06
• 公開（公告）號: CN103232543A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 王淑珍;高振月;何東洋;陳依軍
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K38/17;A61P35/00;A61P37/02;A61P27/02;A61P9/00
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 汪旭東

1.一種具有Tumstatin活性的重組蛋白Tumstatin-CD137L4，其特征在于該蛋白具有tumstatin活性片段氨基酸序列和具有CD137L胞外區氨基酸序列，所述tumstatin活性片段氨基酸序列和CD137L胞外區氨基酸序列通過連接肽氨基酸序列相連接，所述tumstatin活性片段氨基酸序列選自SEQ?ID?NO.13至SEQ?ID?NO.15所示的氨基酸序列中的一種，所述CD137L胞外區氨基酸序列如SEQ?ID?NO.16所示。

2.如權利要求1所述的重組蛋白Tumstatin-CD137L4，其特征在于所述連接肽氨基酸序列選自SEQ?ID?NO.17或SEQ?ID?NO.18。

3.如權利要求2所述的重組蛋白Tumstatin-CD137L4，其特征在于具有SEQ?ID?NO.7至SEQ?ID?NO.12所述的氨基酸序列。

4.編碼如權利要求1-3任一項所述的Tumstatin活性的重組蛋白基因，其特征在于包括編碼tumstatin活性片段的基因和編碼CD137L胞外區的基因，其中所述包括編碼tumstatin活性片段的基因選自SEQ?ID?NO.19-SEQ?ID?NO.21中的一種，所述編碼CD137L胞外區的基因選自SEQ?ID?NO.22。

5.如權利要求4所述的重組蛋白基因，其特征在于還包括編碼連接肽的基因，選自SEQ?ID?NO.23或SEQ?ID?NO.24。

6.如權利要求5所述的重組蛋白基因，其特征在于具有SEQ?ID?NO.1至SEQ?ID?NO.6之一的核苷酸序列。

7.一種編碼重組蛋白Tumstatin-CD137L4的基因，其特征在于與權利要求4-6任一項所述的核苷酸序列相比具有70％及以上的同源性。

8.一種如權利要求1-3任一項所述的具有Tumstatin活性的重組蛋白Tumstatin-CD137L4的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）設計得到如權利要求4-6任一項所述的核苷酸序列；

（2）構建含如權利要求4-6任一項所述的核苷酸序列表達系統，包括構建表達載體并將表達載體轉化入宿主細胞，形成可表達如權利要求1-3任一項所述的具有Tumstatin活性的重組蛋白Tumstatin-CD137L4的重組細胞；

（3）培養以上含有4-6任一項所述的核苷酸序列表達系統的重組細胞，使其表達目的蛋白；

（4）分離純化得到如權利要求1-3任一項所述的具有Tumstatin活性的重組蛋白Tumstatin-CD137L4。

9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于所述表達系統為原核表達系統或真核表達系統，所述原核表達系統選自大腸桿菌表達系統或芽孢桿菌表達系統；所述真核表達系統選自酵母表達系統。

10.如權利要求1-3任一項所述的具有Tumstatin活性的重組蛋白Tumstatin-CD137L4在制備血管生成抑制劑、各種腫瘤相關疾病、視網膜病變、細胞增殖、機體細胞因子合成與分泌、調節機體免疫力藥物中的應用。

11.如權利要求4-6任一項所述的具有Tumstatin活性的重組蛋白Tumstatin-CD137L4基因在制備血管生成抑制劑、各種腫瘤相關疾病、視網膜病變、細胞增殖、機體細胞因子合成與分泌、調節機體免疫力藥物中的應用。