[發(fā)明專利]水包油型酵母β葡聚糖納米乳佐劑及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310162941.0
• 申請日: 2013-05-06
• 公開（公告）號: CN103301456A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳斌;吳成龍;湯細(xì)彪;肖志東;張倩;夏欣;張潔;樊杰;胡睿銘;何啟蓋;陳煥春
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K9/107;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 武漢開元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎;徐紹新

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疫苗佐劑，具體涉及一種水包油型酵母β葡聚糖納米乳佐劑及其制備方法和在制備疫苗中的應(yīng)用。

技術(shù)背景

疫苗佐劑是指與抗原物質(zhì)結(jié)合后能非特異性增強機體對抗原的免疫應(yīng)答或改變其免疫反應(yīng)類型，而本身無免疫原性的一類物質(zhì)。由于大多數(shù)疫苗單獨使用時不能很好激發(fā)免疫反應(yīng)，需要加入疫苗佐劑來增強其免疫效果，因此疫苗佐劑在疫苗應(yīng)用中具有重要的作用。油佐劑是當(dāng)前動物疫苗中應(yīng)用最廣泛的佐劑之一。油佐劑疫苗是以礦物油為油相，抗原溶液為水相，加入表面活性劑后乳化形成的油乳劑疫苗。油乳劑主要包括油包水（W/O），水包油（O/W）兩種劑型。而當(dāng)前國內(nèi)獸用油佐劑疫苗以油包水（W/O）型為主，它雖能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生有效的免疫反應(yīng)，但表現(xiàn)粘稠，注射困難，常在局部引起炎癥反應(yīng)，形成肉芽腫等副作用。同時，礦物油因難以降解而在體內(nèi)殘留，影響了動物肉類的品質(zhì)。水包油（O/W）型油乳佐劑能使機體快速產(chǎn)生免疫反應(yīng)，且副作用小，安全性高，但多表現(xiàn)不穩(wěn)定。因此，克服以上存在的不足，研制出安全、有效、穩(wěn)定的水包油（O/W）型油乳劑是油佐劑疫苗的主要發(fā)展方向。國外已開始在動物疫苗中推廣使用水包油（O/W）型油乳佐劑，而國內(nèi)很少見到成熟的水包油（O/W）型油乳佐劑產(chǎn)品問世。

納米乳是一類乳滴直徑非常小，在納米尺度范圍（20-500nm）的乳液，外觀呈透明或半透明。納米乳是由油相、水相、表面活性劑和助表面活性劑按一定比例混合后自發(fā)形成的熱力學(xué)穩(wěn)定、各向同性、外觀透明或半透明的分散體系。納米乳可作為一種新型藥物載體，提高難溶性藥物的溶解度，促進大分子藥物在體內(nèi)的吸收，從而提高藥物的生物利用度，同時具有安全性高，穩(wěn)定性好等優(yōu)點，因此被廣泛用于醫(yī)藥領(lǐng)域。將納米乳作為佐劑應(yīng)用于動物疫苗不僅可改善常規(guī)油乳佐劑黏度大，注射困難，局部副作用大等缺點，同時在提高疫苗的穩(wěn)定性，增強疫苗的免疫效果方面將顯示獨特優(yōu)勢。

酵母β葡聚糖是從酵母細(xì)胞壁中分離出來的一種免疫多糖，其結(jié)構(gòu)主要由β-1,3-D葡聚糖及β-1,6葡聚糖支鏈構(gòu)成。研究證實，β-1-3-D-葡聚糖具有免疫刺激活性，能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生促炎性細(xì)胞因子（TNF-α，IL-6，IL-10，IL-1β等），可間接激活T細(xì)胞和B細(xì)胞，誘發(fā)機體產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫，可作為免疫佐劑增強機體的免疫力。酵母β葡聚糖具有抗癌、抗輻射、抗菌、抗病毒、抗寄生蟲等活性，還可溶解膽固醇，降血脂的功效，因此被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥，食品，保健品，飼料等行業(yè)。2010年衛(wèi)生部正式批準(zhǔn)酵母β葡聚糖為新資源食品，即可進入食品及相關(guān)行業(yè)。

由于直接從酵母細(xì)胞壁中提取出的酵母β葡聚糖不能溶于水，所以一直以來都是將酵母β葡聚糖通過動物口服的方式來研究其對動物免疫功能的影響。研究證實，酵母β葡聚糖添加在飼料中可調(diào)節(jié)動物的免疫功能，促進淋巴細(xì)胞的增殖與分化，誘導(dǎo)并增強機體的細(xì)胞免疫和體液免疫。Wang等研究報道了酵母β-1,3/1,6-葡聚糖添加在日糧中可顯著提高斷難仔豬外周血T、B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，并可提高豬瘟抗體水平，但其免疫調(diào)節(jié)作用受添加量和時間的影響（Wang?et?al?2008）。Le等研究報道了家禽接種禽流感油乳劑滅活苗后，連續(xù)2周飼喂Sophy公司生產(chǎn)的酵母β葡聚糖（SBG），抗體檢測結(jié)果表明：添加酵母β葡聚糖組的HI抗體和ELISA血清轉(zhuǎn)化率相比于未添加組分別高出1.0-1.5?log2和10-20%（Le?et?al?2011）。近年來，研究人員通過化學(xué)改造的方式（羧甲基化，硫酸化，乙酰化等）將水不溶性酵母β葡聚糖轉(zhuǎn)變?yōu)樗苄越湍甫缕暇厶牵瑫r其免疫活性功能并未受到影響，這種有益改造將改變傳統(tǒng)口服的應(yīng)用方式，擴大酵母β葡聚糖的應(yīng)用范圍，提高其生物利用率。

目前，國內(nèi)外對于酵母β葡聚糖以注射方式研究其免疫刺激活性的報道較少，國內(nèi)報道了在奶牛接種口蹄疫油乳劑滅活苗的基礎(chǔ)上，后海穴再補注酵母葡聚糖注射液可提高奶牛口蹄疫疫苗的免疫效果（專利號：2010105813306），但尚未見報道將水溶性酵母β葡聚糖與作為抗原輸送載體的納米乳佐劑結(jié)合，以利用兩者的協(xié)同加強效應(yīng)，通過水油親和平衡技術(shù)和納米技術(shù)，旨在將水溶性酵母β葡聚糖增溶于納米乳載體中，以研制出一種安全、有效、穩(wěn)定的水包油（O/W）型酵母β葡聚糖納米乳佐劑并可直接用于動物疫苗。

發(fā)明內(nèi)容