[發(fā)明專利]千層金再生體系建立的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310162495.3
• 申請日: 2013-05-03
• 公開（公告）號: CN103222426A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發(fā)明（設計）人: 趙德剛;蘭麗
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京兆君聯(lián)合知識產權代理事務所(普通合伙) 11333
• 代理人: 胡敬紅

1.一種千層金再生體系建立的方法，包括下列步驟：

（1）將外植體千層金無菌苗幼嫩葉片從葉柄處切下，接種到含有激素的MS愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12-15天；

（2）再在含有激素的MS愈傷組織繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)25-30天；

（3）將愈傷組織接種至含有激素的MS分化培養(yǎng)基上進行分化培養(yǎng)；

（4）待不定芽長至2-3cm時，將其切下，接種至MS培養(yǎng)基里進行壯苗培養(yǎng)；

（5）待不定芽長至4-5cm時，將其接種至含有激素的MS生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)；

（6）待不定芽根系長出后，將其煉苗移栽。

所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中的激素為0.01～0.03mg/L的噻重氮苯基脲和0.05～0.1mg/L的萘乙酸，或者0.5～1.5mg/L的6-芐氨基嘌呤和0.05～0.1mg/L的萘乙酸；

所述愈傷組織繼代培養(yǎng)基中的激素為0.01～0.03mg/L的噻重氮苯基脲和0.05～0.1mg/L的萘乙酸，或者0.5～1.5mg/L的6-芐氨基嘌呤和0.05～0.1mg/L的萘乙酸；

所述分化培養(yǎng)基中的激素為0.01～0.03mg/L的噻重氮苯基脲和0.05～0.1mg/L的萘乙酸，或者0.5～1.5mg/L的6-芐氨基嘌呤和0.05～0.1mg/L的萘乙酸；

所述生根培養(yǎng)基中的激素為0.1～1.0mg/L的吲哚丁酸。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中1L?MS培養(yǎng)基中包含：硝酸鉀1900mg，硝酸銨1650mg，氯化鈣440mg，硫酸鎂370mg，磷酸二氫鉀170mg，硫酸錳22.3mg，硫酸鋅8.6mg，硼酸6.2mg，碘化鉀0.83mg，鉬酸鈉0.25mg，乙二胺四乙酸二鈉37.25mg，硫酸亞鐵27.8mg，硫酸銅0.025mg，氯化鈷0.025mg，肌醇100mg，煙酸0.5mg，鹽酸硫胺素0.1mg，鹽酸吡哆素0.5mg，甘氨酸2mg，pH值5.80。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中的激素為0.01mg/L的噻重氮苯基脲和0.1mg/L的萘乙酸；所述愈傷組織繼代培養(yǎng)基中的激素為0.01mg/L的噻重氮苯基脲和0.1mg/L的萘乙酸；所述分化培養(yǎng)基中的激素為0.02mg/L的噻重氮苯基脲和0.2mg/L的萘乙酸；所述生根培養(yǎng)基中的激素為0.2mg/L的吲哚丁酸。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，所述外植體在進行愈傷組織誘導之前，劃出橫向或縱向深至表皮的傷口。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，所述不定芽的煉苗時間為3～5天，移栽所用基質為營養(yǎng)土。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，所述培養(yǎng)的條件均為光照強度為2000lx，每日光照16小時，培養(yǎng)溫度24－28℃。