[發(fā)明專利]一種用于血液凈化法去除內(nèi)毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310161110.1
• 申請(qǐng)日: 2013-05-03
• 公開（公告）號(hào): CN103230781A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王翔;靳欣欣;楊力;毛金春;王菲菲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶大學(xué)
• 主分類號(hào): B01J20/24
• 分類號(hào): B01J20/24;B01J20/30;A61M1/14
• 代理公司: 重慶市恒信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，特別是涉及一種用于血液凈化法去除內(nèi)毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料。?

背景技術(shù)

內(nèi)毒素，即脂多糖，作為革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的一種成分，在人體內(nèi)廣泛存在。人體在嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染等應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，菌體的死亡會(huì)釋放出大量內(nèi)毒素，從而導(dǎo)致內(nèi)毒素血癥（Endotoxemia，ETM），進(jìn)而引起全身炎癥反應(yīng)綜合征、膿毒癥、多器官功能障礙綜合征等。ETM具有高發(fā)病率、高死亡率以及高治療費(fèi)用等特點(diǎn)[1]。?

內(nèi)毒素耐熱且穩(wěn)定，尚未找到安全有效的特異性藥物，而使用抗生素治療會(huì)導(dǎo)致大量革蘭氏陰性菌的死亡進(jìn)而釋放出更多的內(nèi)毒素。因而現(xiàn)在的臨床研究重點(diǎn)越來越多地放在了采用血液凈化方法去除體內(nèi)內(nèi)毒素上，而血液凈化法的根本則是尋找一種高效、安全的凈化吸附材料。?

血液凈化吸附內(nèi)毒素材料通常都是通過大分子樹脂等直接連接配基或者引入間隔臂連接配基。配基材料的選用是決定吸附材料性質(zhì)最關(guān)鍵的因素。S.Mitzner等人[2]將聚乙烯酰胺(PEI)固定于纖維素球載體上，吸附內(nèi)毒素效果明顯。將純化的血清白蛋白共價(jià)交聯(lián)在聚甲基丙烯酸酯上，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)可通過靜電作用吸附內(nèi)毒素、TNF、IL-6等[3]。多粘菌素B是唯一有抗內(nèi)毒素作用的抗生素，特異性強(qiáng)、吸附效率高，日本的研究人員將多粘菌素B固定在中空纖維膜內(nèi)壁上去除血漿中內(nèi)毒素[4]。?

應(yīng)用氨基酸作為內(nèi)毒素吸附材料的研究，方暉等人[5]曾采用球形纖維素連接多種氨基酸，從而研究了其不同的吸附效率；徐堃等人[6]則研究了以PVDF基膜連接不同氨基酸的內(nèi)毒素吸附材料。?

本發(fā)明選擇了氯甲基化聚苯乙烯-二乙苯烯樹脂為基底材料，以對(duì)人體安全無害的肝素連接苯丙氨酸制成吸附材料。該材料兼具了安全無毒性和良好的血液相容性，同時(shí)保持了較高的血漿中的內(nèi)毒素吸附率。?

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種用于血液凈化法去除內(nèi)毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料。本發(fā)明所述肝素-苯丙氨酸吸附材料對(duì)血漿中內(nèi)毒素的去除率高，且血液相容性好，對(duì)人體安全無毒。?

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下措施：?

本發(fā)明所述用于血液凈化法去除內(nèi)毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料，經(jīng)如下方法制備而成：以氯甲基化聚苯乙烯-二乙苯烯樹脂（以下簡稱氯甲基樹脂）為基底材料，經(jīng)乙二胺氨基化后，制成氨基化氯甲基樹脂；之后使用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺，即EDC/NHS作為催化劑連接間隔臂肝素，制成肝素化氯甲基樹脂；最后仍以EDC/NHS為催化劑在肝素上連接苯丙氨酸，制成肝素-苯丙氨酸吸附材料。?

具體地，本發(fā)明所述用于血液凈化法去除內(nèi)毒素的肝素-苯丙氨酸吸附材料，經(jīng)如下方法制備而成：?

（1）氯甲基樹脂的氨基化?

取氯甲基樹脂采用無水乙醇和蒸餾水交替洗滌各三次，抽濾泵抽干備用；將所得氯甲基樹脂5～10g置于20～60ml1,4-二氧六環(huán)中溶脹2～6h，轉(zhuǎn)移至三頸燒瓶中；取0.1～1g四丁基溴化銨和1～10g?NaOH溶于40ml蒸餾水后加入至三頸燒瓶中；再向三頸燒瓶中加入10～50ml乙二胺；控制反應(yīng)溫度為40～100℃，攪拌反應(yīng)1～9小時(shí)；將反應(yīng)所得產(chǎn)物過濾，取濾渣用無水乙醇和蒸餾水交替洗滌至中性，最后經(jīng)真空干燥，得氨基化氯甲基樹脂；?

（2）間隔臂肝素的連接?

取檸檬酸緩沖液100ml，采用0.1～1.0mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)檸檬酸緩沖液的pH至3～7，采用蒸餾水定容至200ml，再加入0.5～1g步驟（1）所得的氨基化氯甲基樹脂、1～10g肝素和1～10g催化劑EDC/NHS，其中催化劑EDC/NHS中EDC和NHS的摩爾比為1︰1；于20～50℃下震蕩反應(yīng)20～40小時(shí)；將所得產(chǎn)物進(jìn)行抽濾，取濾渣用PBS洗液洗滌三次，真空干燥備用，得肝素化氯甲基樹脂；?

（3）配基苯丙氨酸的連接?

取檸檬酸緩沖液100ml，采用0.1～1.0mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)檸檬酸緩沖液的pH至3～7，采用蒸餾水定容至200ml，加入1～10g苯丙氨酸和1～5g催化劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺，即催化劑EDC，活化0.5～1h；再加入0.5～10g步驟（2）所得的肝素化氯甲基樹脂和1～10g催化劑EDC/NHS，其中催化劑EDC/NHS中EDC和NHS的摩爾比為1︰1；于10～40℃下振蕩反應(yīng)10～50h；將所得產(chǎn)物進(jìn)行抽濾，取濾渣用PBS洗液洗滌三次，真空干燥備用，即得肝素-苯丙氨酸吸附材料。?