[發明專利]鐵皮石斛的快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310156723.6
• 申請日: 2013-04-28
• 公開（公告）號: CN103202234A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 王喆之;牛俊峰;呂鼎豪;肖婭萍;任倩俐;王璐
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

技術領域

本發明屬于藥用植物人工種植技術領域，具體涉及蘭科植物鐵皮石斛的快速繁殖方法。

背景技術

鐵皮石斛（Dendrobium?officinale?Kimura?et?Migo），為蘭科石斛屬多年生草本植物，主要分布于云南、安徽、貴州、浙江、江西等地，為一種珍稀的中藥材。因其具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳等功效,位列“中華九大仙草之首”,并被錄入2010版藥典。其主要藥用成分為鐵皮石斛多糖、生物堿、氨基酸和其他微量成分。現代藥理學表明，鐵皮石斛具抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、增強人體免疫力、抑制腫瘤和降低血糖等作用及擴張血管的作用。其特殊的藥理藥效作用，使這一植物的野生資源受到了人為的大規模、掠奪式開采，因而使鐵皮石斛的野生資源緊缺，甚至瀕臨滅絕。

鐵皮石斛種子沒有胚乳，在自然條件下發芽率低，生長緩慢，人工自花傳粉成功率較低，且對生長環境要求苛刻（天然狀態下主要生長于懸崖峭壁），其已無法滿足日益增長的市場需求。而組織培養是目前鐵皮石斛種苗生產的重要途徑,也是挽救這一瀕危物種的有效途徑。發明人所在的研究小組對于鐵皮石斛外植體誘導愈傷，愈傷組織繼代及誘導其長成生根苗的技術已十分成熟。一般從生根苗到出瓶苗需要轉接培養基一次，此階段是鐵皮石斛在組培瓶內生長的最快時期，同時也是產生畸形苗，出現組培瓶開花的主要時期，因此尋求一組影響鐵皮石斛生根苗生長的關鍵激素和添加物是十分必要的。

關于組培苗移栽的基質篩選也是目前國內一些科研工作者和種植者研究的重點，民間有用樹皮作為移栽基質的傳統做法，但關于鐵皮石斛基質的研究，有不同的基質配方和比例。目前，國內大多數以MS培養基為基本培養基，添加不同激素及不同添加物，但是在培養過程中經常遇見產生畸形苗，甚至出現組培苗開花現象，并且存在組培苗生長慢、生物積累率低的現象。目前有關組培苗的大田移栽基質均采用樹皮、木屑、苔蘚等按照一定比例混合，基質不同移栽成活率也盡相同，但至今沒有一種既滿足鐵皮石斛的生長發育，又能有效利用當地的材料作為移栽材料的基質。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服鐵皮石斛種植轉接培養和大田移栽過程中存在的缺點，提供一種成本低，組培苗生長快、移栽成活率高的鐵皮石斛快速繁殖育苗的方法。

解決上述技術問題所采用的技術方案由下述步驟組成：

1、配制鐵皮石斛轉接培養基

向MS培養基中添加萘乙酸、香蕉汁、多效唑，用蒸餾水定容，用0.1mol/L的NaOH水溶液調節pH值至5.8～6.0，121℃滅菌20分鐘，配制成鐵皮石斛轉接培養基，鐵皮石斛轉接培養基中萘乙酸濃度為0.1～0.9mg/L、香蕉濃度為50～150g/L、多效唑濃度為0.1～2.0mg/L。

2、鐵皮石斛組培苗的轉接培養

選取組培室中株高為1～3cm、長出2～3片真葉且根系發育完整的鐵皮石斛組培苗，在超凈工作臺上將組培苗轉接至步驟1配制的鐵皮石斛轉接培養基上，置于溫度為25±2℃、光照強度2000～3000Lx、光照12h/12h的組織培養室培養。

3、煉苗

將步驟2中轉接培養后株高為5～6cm、根長為1～1.5cm的鐵皮石斛幼苗做煉苗處理。

4、配制鐵皮石斛大田移栽基質

將直徑為3～5cm的木塊與直徑為3～5cm的石塊按照體積比為2:1混勻后鋪在苗床上，鋪的厚度為5～8cm，木塊與石塊的混合物上面鋪一層厚度為5～10cm的發酵過的樹皮粉與腐殖質、珍珠巖的體積比為1:0.5～1:0.5～2的基質，在基質上方鋪一層厚度為0.5～2cm的鮮苔蘚，配制成鐵皮石斛大田移栽基質。

5、移栽

將煉苗處理后的鐵皮石斛幼苗按3～4株一穴移栽到步驟4配制的鐵皮石斛大田移栽基質中。

本發明的配制鐵皮石斛轉接培養基步驟1中，向MS培養基中添加萘乙酸、香蕉汁、多效唑，用蒸餾水定容，用0.1mol/L的NaOH水溶液調節pH值至5.8～6.0，121℃滅菌20分鐘，配制成鐵皮石斛轉接培養基，鐵皮石斛轉接培養基中萘乙酸濃度最佳為0.5mg/L、香蕉濃度最佳為75g/L、多效唑濃度最佳為0.9mg/L。

本發明的配制鐵皮石斛大田移栽基質步驟4中，將直徑為3～5cm的木塊與直徑為3～5cm的石塊按照體積比為2:1混勻后鋪在苗床上，鋪的厚度為5～8cm，最佳在木塊與石塊的混合物上面鋪一層厚度為5～10cm的發酵過的樹皮粉與腐殖質、珍珠巖的體積比為1:0.5:0.5的基質，在基質上方鋪一層厚度為0.5～2cm的鮮苔蘚，配制成鐵皮石斛大田移栽基質。