[發明專利]16&18型人乳頭瘤病毒的PCR-熒光檢測用引物、探針、檢測方法及試劑盒

無效

• 申請號: 201310156152.6
• 申請日: 2013-04-27
• 公開（公告）號: CN103276105A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 鄭隆泗;王鵬飛
• 申請（專利權）人: 杭州艾力康醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，涉及一種16&18型人乳頭瘤病毒的PCR-熒光檢測用引物、探針、檢測方法及試劑盒，適用于生殖泌尿道、宮頸脫落細胞、組織及其它體液的16&18型人乳頭瘤病毒(HPV)核酸檢測。

背景技術

HPV(人乳頭瘤病毒)在近20年內已鑒定出100余種基因，至少有85種基因已完全測序。HPV屬乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬，是一個7200～8000bp左右的雙鏈環狀的DNA病毒，基因組編碼3個功能區，即早期轉錄區、晚期轉錄區和上游調控區(URR)。早期區約占4kb，編碼5～8個開放閱讀框架，依次為E6、E7、E1(E8)、E2、E4(E3)、E5，具有參與病毒DNA的復制、轉錄、翻譯、調控和細胞轉化等功能。E1涉及病毒DNA復制，在病毒開始復制中起關鍵作用。E2是一種反式激活蛋白，涉及病毒DNA轉錄的反式激活。E3功能不清。E4與病毒成熟胞漿蛋白有關。E5正好位于E2的下游，編碼一種小蛋白，與細胞轉化有關。E6稱為多功能蛋白，E6蛋白能與細胞內E6相關蛋白(E6AP)形成復合物，特異性地結合抑癌基因P53的產物，使P53降解失活，導致細胞周期失控；作為一種多功能蛋白，它還可通過激活端粒酶使正常細胞永生化；E7能與成視網膜細胞瘤(Rb)抑制蛋白結合，與HPV致癌的關系極為密切。晚期區也稱L區，約3kb，兩個主要ORF分別稱為L1、L2。其功能是編碼病毒的衣殼蛋白，L1區編碼主要衣殼蛋白，是主要的種特異性抗原；它在真核細胞內具有自身組裝成病毒樣顆粒的特性，大量實驗證明它具有較強的免疫原性，能刺激機體產生中和抗體IgG、IgA，可使機體免受相應病毒的攻擊。

HPV是一種部位特異的DNA病毒，在上皮及粘膜的表面復制繁殖。子宮頸的鱗狀上皮細胞與柱狀上皮細胞的連接處是HPV的易感部位。HPV感染宿主細胞后，可以游離狀態存在于宿主細胞中，也可與細胞染色體整合以整合狀態存在于宿主細胞中。文獻報道，宮頸上皮內瘤變細胞中HPV16、HPV18的DNA絕大多數呈整合形式，在浸潤型宮頸癌中則以游離和整合形式共存。在高危型HPV中，E6、E7是主要的轉化蛋白，它們可以通過和p53及視網膜母細胞瘤蛋白(p?Rb)的相互作用使正常細胞發生惡性轉化。HPV能和宿主基因組發生整合，使E2開放讀碼框失活并失去其阻遏E6、E7轉錄的功能，多種基因改變的積累作用導致了癌癥的發生。大部分免疫系統正常的人感染HPV后可以自行清除病毒并且不會發病，但是病毒的持續感染卻容易誘發宮頸疾病。

臨床上有些學者根據HPV致癌危險性大小不同將HPV分為低危型和高危型。低危型HPV主要引起肛門皮膚和外生殖器疣類病變，其亞型主要包括HPV6，11，30，39，42，43和44型；高危型HPV主要包括HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56和58型，主要引起宮頸癌、外陰癌、肛門癌等惡性腫瘤。新近研究資料證實，宮頸癌病因是多因素的，但與HPV感染關系較密切。尤其是高危型HPV感染是宮頸癌和癌前病變發生的必要條件，而高危型HPV中又以16/18型常見，其中超過2/3的宮頸癌與其感染相關。HPV分型還與宮頸癌病理類型有關，HPV16與宮頸鱗癌關系最密切，HPV18最易導致宮頸腺癌。Berlin?Grace研究顯示，高危型HPV16是致宮頸癌常見病毒，但HPV18的致癌作用比HPV16潛力更大。HPV16/18感染是宮頸癌高危因素，能客觀反映宮頸癌的惡性程度，HPV型別也可反映癌組織的病理學類型，可能作為評估患者預后的新指標。

現有技術中人乳頭瘤病毒的快速檢測方法如下：

目前臨床上用于人乳頭瘤病毒(HPV)的提前診斷和治療以及預后判斷的方法主要有病理學檢查，細胞學檢查，免疫組化檢查等。