[發明專利]一種聚乙二醇修飾的蛋白質藥物的修飾位點的測定方法

有效

• 申請號: 201310154747.8
• 申請日: 2013-04-28
• 公開（公告）號: CN104120163B
• 公開（公告）日: 2017-03-15
• 發明（設計）人: 趙偉;李國柱;張喜全;曹宇虹;畢海;秦宇;蘇賢德;蔣丹
• 申請（專利權）人: 正大天晴藥業集團股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34;C12Q1/26;G01N33/50
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1.一種聚乙二醇修飾的蛋白質藥物的修飾位點的測定方法，其中修飾位點為氨基，所述方法包括以下步驟：

（1）以聚乙二醇修飾的蛋白質藥物的位置異構體為原料，制備均一化修飾的多肽片段，其中所述多肽片段與聚乙二醇共價連接，且具有3-50個氨基酸殘基；

（2）采用Edman降解法測定步驟（1）中的均一化修飾的多肽片段的氨基酸序列；

（3）將步驟（2）中的氨基酸序列對應至相應的蛋白質藥物序列，若步驟（2）中出現兩個或多個無法正常測出的氨基酸，那么除半胱氨酸外的那個氨基酸所對應的位點即為修飾位點；若步驟（2）中僅出現一個無法正常測出的氨基酸，那么該氨基酸所對應的位點即為修飾位點。

2.權利要求1的方法，其中步驟（1）中的多肽片段具有3-30個氨基酸殘基。

3.權利要求2的方法，其中步驟（1）中的多肽片段具有3-20個氨基酸殘基。

4.權利要求3的方法，其中步驟（1）中的多肽片段具有4-15個氨基酸殘基。

5.權利要求1-4中任一項的方法，其中聚乙二醇修飾的蛋白質藥物選自聚乙二醇腺苷脫氨酶、聚乙二醇天門冬酰胺酶、聚乙二醇干擾素、聚乙二醇人粒細胞集落刺激因子、聚乙二醇人GH受體拮抗劑、聚乙二醇促紅細胞生成素、聚乙二醇尿酸酶，聚乙二醇降纖酶、聚乙二醇蛇毒凝血酶、聚乙二醇抑肽酶、聚乙二醇超氧化物歧化酶或聚乙二醇凝血因子VIII。

6.權利要求5的方法，其中聚乙二醇修飾的蛋白質藥物是聚乙二醇干擾素。

7.權利要求6的方法，其中聚乙二醇修飾的蛋白質藥物是聚乙二醇干擾素α-2a或聚乙二醇干擾素α-2b。

8.權利要求1-7中任一項的方法，其中用于修飾蛋白質藥物的聚乙二醇是直鏈或分枝的聚乙二醇，其分子量為約5k到約60k道爾頓。

9.權利要求8的方法，其中所述聚乙二醇的分子量為約20k到約50k道爾頓。

10.權利要求1-9中任一項的方法在聚乙二醇修飾的蛋白質藥物中氨基修飾位點的確證中的應用。