[發明專利]用于腫瘤病理診斷的探針及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201310152856.6
• 申請日: 2013-04-27
• 公開（公告）號: CN103267850A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發明（設計）人: 蔡林濤;胡德紅;盛宗海;方勝濤;張鵬飛;王亞楠;高篤陽;龔萍
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別是涉及一種用于腫瘤病理診斷的探針及其制備方法和應用。

背景技術

近廿年來，腫瘤死亡率急劇上升。在35至59歲的中壯年人群中，腫瘤已列居各類死因之首。有數據顯示：我國腫瘤發病率約為200/10萬人，每年新發病例約220萬人以上，在治療的患者約600萬人以上。腫瘤已成為造成我國最佳勞動力損失、醫療費用上漲的一大原因。盡管已經研究出了一些預防腫瘤的化學藥物，但至今仍沒有一種有效控制腫瘤的一級預防措施。所以，當前乃至將來相當長一段時間內，早期診斷仍是腫瘤防治的一項基本策略。

腫瘤特異性標志物檢測是臨床上檢查腫瘤的重要手段之一，主要包括非常成熟的免疫組織化學染色(immunohistoehemicalstaining，IHC)、免疫熒光技術（Immunofluorescence?technique，IF）、熒光原位雜交(fluoreseeneeinsitu?hybridization，FISH)和顯色原位雜交(ehromogenieinsitu?hybridiZation，CISH)。IHC和IF檢測的是細胞膜上腫瘤特異性標志物的表達情況，而FISH和CISH則是通過檢測HERJZ基因擴增的水平來對癌癥進行檢測。這些方法對離體腫瘤組織及細胞特異性標志物的檢測已經得到廣泛的認可，在某種程度上較好的滿足了乳腺癌等腫瘤的臨床診療需求。但是，由于這些方法要用到天然的過氧化物酶和有機熒光染料，而天然的過氧化物酶容易變性和失活，且提純困難、價格昂貴，儲藏和使用不便，成本高。有機熒光染料的熒光容易萃滅，導致檢測結果易出現假陰性等不準確的診斷結果。

發明內容

基于此，有必要提供一種對腫瘤病理診斷具有較高準確性的用于腫瘤病理診斷的探針。

一種用于腫瘤病理診斷的探針，包括金納米簇及腫瘤特異性標志物的抗體，所述金納米簇與所述腫瘤特異性標志物的抗體通過點擊化學方式連接，其中，所述金納米簇與所述腫瘤特異性標志物的抗體的摩爾比為1:1～1:100。

在其中一個實施例中，所述點擊化學方式連接為所述金納米簇表面修飾的疊氮基與所述腫瘤特異性標志物的抗體表面修飾的炔基發生點擊化學反應而連接。

在其中一個實施例中，所述金納米簇的粒徑為0.5～2nm。

在其中一個實施例中，所述腫瘤特異性標志物的抗體為乳腺癌的抗HER2蛋白抗體、乳腺癌的抗P53蛋白抗體、乳腺癌的抗p185蛋白抗體、肺癌的CEA單克隆抗體或抗人肺癌單克隆抗體(McAb)N-35。

由于金納米簇既具有近紅外熒光特性，又具有高過氧化物模擬酶活性，而且還具有尺寸小、生物相容性好等特性。從而金納米簇可以作為生物熒光探針，以及代替天然過氧化物酶用于酶檢測的方法中。將腫瘤特異性標志物的抗體通過點擊化學連接到金納米簇上，得到上述用于腫瘤病理診斷的探針。該探針具有優異的化學和物理性能，粒徑小，比表面積大，懸浮穩定性好，對腫瘤具有很強的靶向性。將上述探針用于腫瘤病理診斷中時，在組織學水平上，可以發展一種基于過氧化物模擬酶活性的免疫組化和基于近紅外熒光特性的免疫熒光的雙重共定位的染色方法，從而上述用于腫瘤病理診斷的探針對腫瘤病理診斷具有較高準確性。該方法不僅增加了單張切片的信息含量，還可初步判斷由污點造成的非特異性熒光著色，更利于綜合的分析判斷實驗結果，可增加實驗的可信度和說服力，從而有助于及時、正確地做出病理診斷。而且將上述探針用于腫瘤病理診斷時，不需要加入一抗和酶（熒光染料）標二抗，操作更簡便，工作量更少，能有效節約成本。更為免疫組化和免疫熒光的相互轉化與銜接提供技術和思維平臺。

一種用于腫瘤病理診斷的探針的制備方法，包括如下步驟：

將濃度為1～100mmol/L的氯金酸溶液與濃度為1～500mg/mL的牛血清白蛋白或人血清白蛋白溶液混合均勻，然后加入濃度為0.1～10mol/L的NaOH溶液，并于搖床中于0～100℃下溫育3～100小時，得到金納米簇，其中，所述NaOH與所述氯金酸的摩爾比為1:1～1:100；

將所述金納米簇與經NHS預處理的疊氮化試劑按照摩爾比為1:1～1:100的比例混合，得到表面修飾有疊氮基的金納米簇；

將腫瘤特異性標志物的抗體與炔基化試劑按照摩爾比為1:1～1:100的比例混合均勻并反應0.5小時，反應液經純化處理后，得到表面修飾有炔基的腫瘤特異性標志物的抗體；