[發明專利]復合晶膠連續床介質、制備與分離IgG和白蛋白的應用

有效

• 申請號: 201310151726.0
• 申請日: 2013-04-26
• 公開（公告）號: CN103230784A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 贠軍賢;姚善涇;張頌紅;姚克儉;葉佳蕾;徐林紅
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01D15/00;C07K16/06;C07K14/765;C07K1/16
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;王兵

1.一種復合晶膠連續床介質，其特征在于所述復合晶膠連續床介質孔徑0.1～300μm，孔隙率80～95%，所述復合晶膠連續床介質帶有式（Ⅰ）所示疏水芐基-陰離子交換叔氨基的功能基團：

式（Ⅰ）中n為正整數；

所述的復合晶膠連續床介質是將疏水芐基-陰離子交換叔氨基功能基團固載在復合晶膠連續床介質基質的骨架中；

所述復合晶膠連續床介質基質按如下方法制備：將飽和纖維素顆粒加入甲基丙烯酸羥乙酯與聚乙二醇二丙烯酸酯的混合水溶液A中，在催化劑的作用下，經結晶致孔和聚合反應，制得所述復合晶膠連續床介質基質；所述飽和纖維素顆粒是將纖維素粉在甲基丙烯酸羥乙酯和聚乙二醇二丙烯酸酯的混合水溶液B中吸附飽和，所述纖維素粉粒徑＜2mm；所述催化劑為過硫酸銨與四甲基二乙胺以質量比1：1～3的混合，所述催化劑質量用量是混合水溶液A中甲基丙烯酸羥乙酯與聚乙二醇二丙烯酸酯總質量的0.5～1%；所述混合水溶液A中甲基丙烯酸羥乙酯與聚乙二醇二丙烯酸酯質量比為3：1，混合水溶液A中甲基丙烯酸羥乙酯與聚乙二醇二丙烯酸酯總質量濃度為15%；所述飽和纖維素顆粒質量用量以混合水溶液A的體積用量計為3.6～6.4g/ml；所述混合水溶液B與混合水溶液A組成相同。

2.如權利要求1所述復合晶膠連續床介質，其特征在于所述結晶致孔和聚合反應的溫度為–15℃，反應時間為20h。

3.如權利要求1所述的復合晶膠連續床介質，其特征在于所述的復合晶膠連續床介質按如下方法制得：將可與復合晶膠連續床介質基質發生接枝反應的單體為原料，以Cu³⁺離子水溶液為催化劑，通過與所述的復合晶膠連續床介質基質進行接枝反應，固載在復合晶膠連續床介質基質內，即獲得所述復合晶膠連續床介質；所述接枝反應的單體為N,N,N-三甲基乙烯基苯甲氯化銨；所述接枝反應的單體以0.5mol/L單體水溶液的形式加入，所述單體水溶液的體積用量為復合晶膠連續床介質基質體積的5倍，所述Cu³⁺離子水溶液的濃度為0.037M，Cu³⁺離子水溶液體積用量為復合晶膠連續床介質基質體積的3倍；所述接枝反應的溫度為40～55℃，反應時間為0.5～4h。

4.一種權利要求1所述復合晶膠連續床介質在快速分離人血清IgG和白蛋白中的應用，其特征在于所述的應用為：將人血清用pH7.2～7.8的緩沖液稀釋制成人血清稀釋液，然后以復合晶膠連續床介質為層析柱進行分離，分別以50～100mM、150～200mM、1M的NaCl洗脫液洗脫，收集50～100mM的NaCl洗脫液洗脫時出現洗脫峰的流出液，經透析和冷凍干燥即得人血清白蛋白；收集150～200mM的NaCl洗脫液洗脫時出現洗脫峰的流出液，經透析和冷凍干燥即得IgG。

5.如權利要求4所述應用，其特征在于所述人血清用pH7.2～7.8、20～50mM的磷酸鹽緩沖液稀釋6～15倍。

6.如權利要求4所述應用，其特征在于所述應用為：將人血清用20mM、pH7.8的磷酸鹽緩沖液稀釋15倍，以復合晶膠連續床介質為層析柱進行分離，以1cm/min的速度上樣，然后用20mM、pH7.8的磷酸鹽緩沖液沖洗，再用20mM、pH7.8的磷酸鹽緩沖液配制的NaCl終濃度分別為100mM、150mM、1M的洗脫液依次洗脫，洗脫流速均為1cm/min，收集NaCl終濃度100mM洗脫液洗脫時出現洗脫峰的流出液，經透析和冷凍干燥即得人血清白蛋白；收集NaCl終濃度150mM洗脫液洗脫時出現洗脫峰的流出液，經透析和冷凍干燥即得免疫球蛋白抗體IgG。