[發明專利]含有富含亮氨酸重復序列的融合蛋白及其制法和應用

在審

• 申請號: 201310151606.0
• 申請日: 2013-04-26
• 公開（公告）號: CN104119447A
• 公開（公告）日: 2014-10-29
• 發明（設計）人: 李華順
• 申請（專利權）人: 李華順
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N5/10;C12N5/071;C12N5/073;C12P21/00;C12R1/91
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

1.一種融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白自N端至C端具有式Ia或Ib所述的結構：

A—X—E—Y1—Y2????式Ia；

A—Y2—Y1—E—X????式Ib；

其中，

A為任選的分泌信號肽；

X為Slit2蛋白的富含亮氨酸的重復序列2(leucine-rich?repeat2，LRRs2)元件；

E為酶切位點；

Y1為第一標簽多肽元件；

Y2為第二標簽短肽元件，所述第二標簽短肽元件為His標簽元件；

“—”表示連接上述元件的肽鍵或肽接頭。

2.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Y1包括SEQ?ID?NO.:2所示的改良型親和素標簽(Strap?II標簽)、鏈親和素(Strepavidin)標簽。

3.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Y1為Strap?II標簽，而Y2為8×His標簽元件。

4.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的Slit2LRR2的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.:5所示。

5.一種分離的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸編碼權利要求1所述的融合蛋白。

6.一種表達載體，其特征在于，所述的表達載體含有權利要求5所述的多核苷酸。

7.一種宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞含有權利要求6所述的表達載體或轉染了權利要求5所述的多核苷酸。

8.如權利要求7所述的宿主細胞，其特征在于，所述的宿主細胞包括哺乳動物細胞；較佳地包括CHO細胞、293細胞。

9.一種制備Slit2LRR2蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括步驟：

(i)在合適的表達條件下，培養如權利要求8所述的宿主細胞，從而表達權利要求1所述的融合蛋白；

(ii)從培養體系中分離純化出權利要求1所述的融合蛋白；

(iii)對所述的融合蛋白，用針對元件E的蛋白酶進行酶解，從而制得Slit2LRR2。

10.一種制備Slit2LRR2蛋白的方法，其特征在于，所述的方法包括步驟：

對權利要求1所述的融合蛋白，用針對元件E的蛋白酶進行酶解，從而制得Slit2LRR2。

11.一種純化的Slit2LRR2蛋白，其特征在于，是通過權利要求9或10所述的方法生產制備的。