[發明專利]用于檢測N-乙酰轉移酶2的熒光探針

無效

• 申請號: 201310149127.5
• 申請日: 2013-04-26
• 公開（公告）號: CN103242822A
• 公開（公告）日: 2013-08-14
• 發明（設計）人: 徐玉芳;王新;崔雷;王蕊;錢旭紅;朱維平;周南南
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C07D209/10
• 代理公司: 上海順華專利代理有限責任公司 31203
• 代理人: 薛美英

技術領域

本發明涉及一種用于檢測N-乙酰轉移酶2（N-acetyltransferase2,NAT2）活性的熒光探針。

背景技術

N-乙酰轉移酶2(N-acetyltransferase2,NAT2)是人體重要的代謝酶，主要分布在肝臟，用于催化芳香胺及雜環胺類乙酰化。其對芳香胺類致癌物的活化和滅活及芳胺類藥物的代謝起到關鍵的作用。

遺傳和環境等因素共同導致了不同人群的N-乙酰轉移酶2活性的巨大差異。目前，高達30%的藥物具有芳胺和雜環胺類結構，從而對臨床用藥提出了巨大的挑戰。同時，國內外大量研究證明N-乙酰轉移酶2不僅與多種腫瘤有關，而且類風濕性關節炎，糖尿病等多種疾病相關。因此，簡單準確的檢測N-乙酰轉移酶2的活性，對人類的健康至關重要。

目前，檢測N-乙酰轉移酶2的方法主要有高壓液相色譜（HPLC），放射性元素標記和聚合酶鏈式反應（PCR）等，這些方法主要缺點是耗時長，成本高，操作復雜。

熒光檢測簡便，靈敏快捷(Chem.Commun.2010,46,7121)。然而該熒光探針波長為580nm，研究中發現相對于生物應用波長較短，具有較強的背景熒光。因此，開發吸收和發射波長都在近紅外區域的熒光探針用于檢測N-乙酰轉移酶2的活性對于臨床疾病早期診斷，個性化給藥和新藥研發過程中藥代動力學的研究具有重要的意義。

發明內容

本發明的發明人經大量的母體化合物的篩選，并對篩選獲得的母體化合物進行適當的化學修飾后，獲得一類化合物。該類化合物的吸收和發射波長都在近紅外區域，且基本沒有背景熒光干擾，可用作檢測NAT2活性的熒光探針。

本發明的一個目的在于，提供一種用于檢測NAT2活性的熒光探針。

本發明所述的熒光探針為式Ⅰ所示化合物，或其在藥學上可接受的鹽：

式Ⅰ中，R₁和R₂分別獨立選自：親水基團或親水陰離子基團中一種；R₃和R₄分別獨立選自：C₁～C₄直鏈或支鏈的烷基中一種；R₅～R₉分別獨立選自：氫（H）、C₁～C₄直鏈或支鏈的烷基、C₁～C₄直鏈或支鏈的烷氧基或氨基（-NH₂）中一種，且R₅～R₉中至少有一個為-NH₂；X為O、S或NH。

本發明另一個目的在于，提供一種制備式Ⅰ所示化合物的方法。

所述方法的主要步驟是：在有惰性氣體存在及室溫條件下，由式Ⅱ所示化合物與式Ⅲ所示化合物于無水有機溶劑中反應得到目標化合物（式Ⅰ所示化合物）：

式Ⅱ和Ⅲ中，R₁～R₉及X的定義與前文所述相同，Y為Cl或Br。

其中，式Ⅱ所示化合物是已知物，可采用現有技術制備。

附圖說明

圖1為探針CYP1及其代謝產物N-CYP1在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的吸收和發射光譜；

其中，A)為探針CYP1及其代謝產物N-CYP1在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的吸收光譜；

B)為探針CYP1及其代謝產物N-CYP1在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的發射光譜。

圖2為探針CYP2及其代謝產物N-CYP2在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的吸收和發射光譜；

其中，A)為探針CYP2及其代謝產物N-CYP2在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的吸收光譜；

B)為探針CYP2及其代謝產物N-CYP2在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的發射光譜。

圖3為探針CYP3及其代謝產物N-CYP3在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的吸收和發射光譜；

其中，A)為探針CYP3及其代謝產物N-CYP3在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的吸收光譜；

B)為探針CYP3及其代謝產物N-CYP3在pH=7.5的Tris-HCl緩沖溶液中(含1%DMSO)的發射光譜。