[發(fā)明專利]檢測(cè)黃熱病毒的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310141809.1
• 申請(qǐng)日: 2013-04-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103235131A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 史蕾;馬嵐;顧大勇;吳峰;向軍儉;徐云慶;趙純中;冬冰;何建安;徐華;劉春曉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/569;G01N33/531
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

1.檢測(cè)黃熱病毒的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品，包括相互連接的樣品墊、吸水墊和具有相互分離的檢測(cè)線和質(zhì)控線的包被膜，所述包被膜位于所述樣品墊和所述吸水墊之間，其特征在于：所述樣品墊上負(fù)載有磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體，所述檢測(cè)線包被有黃熱病毒包被抗體，所述質(zhì)控線包被有與所述磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體特異結(jié)合的第二抗體；

所述磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體為將待標(biāo)記黃熱病毒抗體和羧基修飾的磁性納米粒子以肽鍵共價(jià)結(jié)合形成的聚合體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品，其特征在于：所述待標(biāo)記黃熱病毒抗體的親和常數(shù)為10⁸M^-1、10⁶～10⁸M^-1或10⁷～10⁸M^-1；所述黃熱病毒包被抗體的親和常數(shù)為10⁸M^-1、10⁶～10⁸M^-1或10⁷～10⁸M^-1；所述羧基修飾的磁性納米粒子的平均直徑為100nm、80-200nm或60-300nm；所述羧基修飾的磁性納米粒子的直徑變異系數(shù)為15%、10%-20%或10%-30%；所述羧基修飾的磁性納米粒子的飽和磁化強(qiáng)度為40emu/g。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品，其特征在于：所述磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體按照包括如下步驟的方法制備：將所述羧基修飾的磁性納米粒子活化后與所述待標(biāo)記黃熱病毒抗體以50：3的質(zhì)量比進(jìn)行反應(yīng)得到以肽鍵共價(jià)結(jié)合形成的磁性納米粒子與黃熱病毒抗體的偶聯(lián)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品，其特征在于：所述磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體的制備方法中，所述羧基修飾的磁性納米粒子用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺進(jìn)行活化；所述活化中，所述羧基修飾的磁性納米粒子活化所用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺的濃度分別為5mM和10mM；所述活化的溫度為37℃，時(shí)間為0.5h。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品，其特征在于：所述磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體的制備方法中，所述將羧基修飾的磁性納米粒子活化后與所述待標(biāo)記黃熱病毒抗體以50：3的質(zhì)量比進(jìn)行反應(yīng)是在37℃在濃度為50mM?pH為8.5的硼砂緩沖液中反應(yīng)3.5小時(shí)。

6.根據(jù)權(quán)利要求3、4或5所述的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品，其特征在于：所述磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體的制備方法中還包括將所述磁性納米粒子與黃熱病毒抗體的偶聯(lián)物用BSA溶液封閉后得到所述磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體的步驟，所述BSA溶液的濃度為5%（質(zhì)量百分濃度），所述封閉的溫度為37℃，時(shí)間為0.5h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品，其特征在于：所述側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品按照權(quán)利要求8-10中任一所述的方法制備。

8.制備權(quán)利要求1-6中任一所述的檢測(cè)黃熱病毒的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品的方法，包括：

Ⅰ、分別制備權(quán)利要求1-6中任一所述的檢測(cè)黃熱病毒的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品中所述樣品墊和所述包被膜；

Ⅱ、將步驟Ⅰ得到的所述樣品墊、所述包被膜和吸水墊相互連接，得到所述包被膜位于所述樣品墊和所述吸水墊之間的檢測(cè)黃熱病毒的側(cè)向流免疫層析測(cè)定試紙。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于：所述包被膜的制作方法包括：將所述黃熱病毒包被抗體以為2mg/ml的濃度包被于硝酸纖維素膜得到所述檢測(cè)線，將權(quán)利要求1-6中任一所述的檢測(cè)黃熱病毒的側(cè)向流免疫層析測(cè)定產(chǎn)品中所述第二抗體以1mg/ml的濃度包被于所述硝酸纖維素膜上與所述檢測(cè)線相互分離的區(qū)域，得到所述質(zhì)控線，具有所述檢測(cè)線和所述質(zhì)控線的所述硝酸纖維素膜即為所述包被膜。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述樣品墊的制作方法包括：將權(quán)利要求1-6中任一所述的磁性納米粒子標(biāo)記黃熱病毒抗體以0.5mg/ml的濃度包被于玻璃纖維素膜得到所述樣品墊。