[發明專利]一種基于硝酸纖維素膜的便捷癌細胞捕獲芯片

無效

• 申請號: 201310139673.0
• 申請日: 2013-04-22
• 公開（公告）號: CN103235124A
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發明（設計）人: 高明霞;張祥民;張鵬
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/531
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

1.?一種CTC捕獲芯片，其特征在于，以硝酸纖維素膜為主體，其透明軟化后固定在PMMA有機玻璃板上，然后直接吸附固定上抗體而組成。

2.?如權利要求1所述的CTC捕獲芯片，其特征在于，所述硝酸纖維素膜的孔徑為0.2-0.45μm?。

3.?一種如權利要求1所述的CTC捕獲芯片的制備方法，其特征在于具體步驟如下：

（1）將商品化的硝酸纖維素膜切成1-3?cm×1-3?cm的小塊，然后放入純乙醇中浸泡3-15?s，讓其軟化變透明，并平鋪在預先剪裁好的PMMA平板上自然風干，裝配制作出芯片基底；

（2）在吸附抗體以前，芯片基底需要在含10%-30%乙腈的1-5?mM?PBS緩沖液中浸泡0.5-1?h活化；然后把濃度為0.5?μg/μL?的20-60?μL抗體溶解在200?μL含10%-30%乙腈的1-5?mM?PBS緩沖液中，均勻滴加在CTC芯片基底上，在37?℃下反應0.5-1?h，利用靜電作用和疏水作用讓抗體吸附固定在CTC芯片上；然后用PBS緩沖液洗去多余的抗體，再加上質量濃度為?0.1%-0.5%的50?μL的BSA溶液封端0.5-1?h。

4.?如權利要求1所述的CTC捕獲芯片在癌細胞捕獲實驗中的應用，其特征在于把非小肺癌細胞NCI-H1650培養收集起來后，用PBS稀釋成10-100個/μL的濃度，滴加一定數量的癌細胞液滴于CTC芯片上，在37?℃恒溫孵育箱中孵育0.5-1?h，PBS洗去未捕獲的癌細胞，然后進行檢測計數。

5.?一種利用如權利要求1所述的CTC捕獲芯片來模擬人全血中CTC檢測計數的方法，其特征在于向1-5?mL新鮮采集的健康人外周全血樣品中加入100-20000個癌細胞，然后用0.15?M?NH₄Cl-K₂CO₃進行紅細胞裂解，離心棄去上清，取下層單核細胞與CTC芯片孵育0.5-1?h，PBS沖洗后進行計數檢測。