[發明專利]一種利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法有效
| 申請號： | 201310139348.4 | 申請日： | 2013-04-19 |
| 公開（公告）號： | CN103194487A | 公開（公告）日： | 2013-07-10 |
| 發明（設計）人： | 滕小娟;開國銀;季倩;時敏;崔麗潔 | 申請（專利權）人： | 上海師范大學 |
| 主分類號： | C12N15/82 | 分類號： | C12N15/82;C12N15/60;C12N15/53;A01H5/06 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227 | 代理人： | 吳瑾瑜 |
| 地址： | 200234 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 基因 轉化 策略 獲取 喜樹堿 新型 方法 | ||
1.一種利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將異胡豆苷合成酶基因CrSTR和香葉醇-10-羥化酶基因CrG10H插入植物表達載體，構建重組載體；
(2)將步驟（1）所獲得的重組載體轉入發根農桿菌，構建含有重組載體的發根農桿菌；
(3)利用所構建的含有重組載體的發根農桿菌菌株遺傳轉化短小蛇根草，獲得毛狀根；
(4)檢測步驟（3）毛狀根中的CrSTR和CrG10H基因，取篩選結果為陽性的轉基因毛狀根克隆；
(5)利用植物激素對獲得的轉基因毛狀根進行誘導，使其喜樹堿含量進一步提高。
2.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，步驟（1）中的CrSTR和CrG10H基因片段以長春花幼苗RNA為模板PCR獲得。
3.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，步驟（1）中的植物表達載體為pCAMBIA質粒或pBI質粒。
4.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，步驟（2）所述的發根農桿菌為發根農桿菌菌株C58C1、發根農桿菌菌株A4或發根農桿菌菌株L?BA9402。
5.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，步驟（3）中用含有重組植物表達載體的發根農桿菌菌株遺傳轉化短小蛇根草莖段，獲得毛狀根。
6.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，步驟（4）所述的檢測方法為PCR及Southern?blotting檢測。
7.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，步驟（5）所述的植物激素為茉莉酸、脫落酸、水楊酸或二甲基亞砜。
8.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，步驟（5）中，將所獲得的毛狀根液體培養35～45天后用植物激素誘導。
9.權利要求1所述利用基因共轉化策略獲取喜樹堿新型藥源的方法，其特征在于，將步驟（5）獲得的高產轉基因毛狀根粗提物進行抗腫瘤活性分析；所述抗腫瘤活性分析方法為MTT法。
10.一種用于提高喜樹堿含量的重組載體，其特征在于，含有異胡豆苷合成酶基因CrSTR和香葉醇-10-羥化酶基因CrG10H。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于上海師范大學，未經上海師范大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201310139348.4/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇：一種耐磨煤粉輸送彎管
- 下一篇：鋼帶增強鋼絲網骨架塑料復合管
