[發明專利]漆黃素在制備抗李斯特菌感染藥物中的應用

有效

• 申請號: 201310138824.0
• 申請日: 2013-04-22
• 公開（公告）號: CN103191099A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 鄧旭明;王建鋒;譚為;張雨;周旋
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K31/352
• 分類號: A61K31/352;A61P31/04
• 代理公司: 長春市四環專利事務所 22103
• 代理人: 郭耀輝

技術領域

本發明涉及漆黃素在制備抗李斯特菌感染藥物中的應用，屬于醫藥領域。

背景技術

漆黃素（Fisetin）是從漆樹科植物木臘樹等植物中分離出的一種天然四羥基黃酮類化合物，在草莓、葡萄、蘋果、洋蔥等蔬菜和果實中也有存在。具有明顯的抗氧化、抗炎特性，對免疫系統還有一定的調節作用，但目前為止國內外未見漆黃素用于抗李斯特菌感染的報道。

單核細胞增生性李斯特氏菌（Listeria?monocytogenges，LM）簡稱單增李斯特菌，是一種重要的人獸共患病病原菌，也是食品中最常見、公共衛生學上重要的食源性病原菌。該菌可感染人、多種畜類及禽類，引起腦膜炎、敗血癥、孕婦流產及單核細胞增多，新生兒、老年人、懷孕婦女及免疫功能低下者更易感染發病。本菌引起的疾病發病率雖低，但病死率可高達30%～70%。近年來，抗生素的大量使用導致細菌耐藥率增高，已經發現多種臨床分離株對四環素和環丙沙星等抗生素耐受嚴重，造成李斯特菌病的治療面臨無藥可治的局面。因此，尋找新型、安全的治療藥物迫在眉睫。漆黃素來自于我國傳統中藥，本發明研究證實了漆黃素對抗李斯特菌感染具有較好的治療效果。

發明內容

漆黃素的分子結構如下：

本發明通過羊紅細胞溶血試驗、小鼠巨噬樣細胞J774和小鼠腹腔巨噬細胞損傷的保護試驗以及小鼠李斯特菌感染模型證實其抗李斯特菌感染作用。

三、具體實施方式

1.?溶血試驗

純化的李斯特菌溶血素于96孔板中作連續的二倍稀釋，每個孔中加入10⁷個羊紅細胞，于37℃中孵育30h后離心。使紅細胞溶解的最高稀釋倍數視為溶血滴度（Hemolysis?titre）。

不加漆黃素和加入不同濃度的漆黃素后李斯特菌溶血素的溶血滴度如下表1：

表1.?漆黃素對李斯特菌溶血素溶血活性的抑制作用

漆黃素（μg/ml）溶血滴度（Hemolysis titre）02048161686442562512

2.小鼠巨噬樣細胞J774和小鼠腹腔巨噬細胞損傷的保護試驗

李斯特菌L.?monocytogenes?EGD和ATCC?19115于TSB培養基中培養至OD600nm=0.8，取5ml的細菌培養物，離心并重懸于10ml的DMEM培養基中。J774細胞于DMEM培養基（加入10%胎牛血清）中于37℃，5%CO₂培養24小時后，以2×10⁴個細胞/孔鋪于96孔細胞培養板中，每孔200μl。細胞貼壁后，加入100μl金葡菌懸液，并加入不同濃度的漆黃素，置于細胞培養箱中于37℃，5%CO₂共培養5h。離心取100μl上清，并加入LDH試劑100μl，37℃孵育30分鐘，后用酶標儀測570nm吸光值，比較不同濃度漆黃素處理的細胞LDH釋放率。從BALB/c小鼠分離腹腔巨噬細胞，然后以同樣的細胞數量鋪于96孔細胞培養板中，后續操作同上。

結果表明，漆黃素能夠保護李斯特菌溶血素介導的小鼠巨噬樣細胞J774和小鼠腹腔巨噬細胞損傷，該作用呈現劑量依賴性。

小鼠李斯特菌感染的實驗治療學研究

3.1?小鼠李斯特菌感染模型