[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻的培育方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201310138291.6
• 申請日: 2013-04-19
• 公開（公告）號: CN103421838A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林擁軍;唐微
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;A01H5/00;C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 張紅兵

1.一種培育轉(zhuǎn)基因高抗螟蟲水稻的方法，其特征在于，利用序列表SEQ?ID?NO：1所示的人工合成的抗蟲基因cry1C，構(gòu)建植物表達載體pBar13-Cry1C，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法，將所述的植物表達載體pBar13-Cry1C導(dǎo)入到水稻受體細胞中，使其在轉(zhuǎn)基因水稻細胞中表達cry1C基因，通過在室內(nèi)和田間檢測轉(zhuǎn)基因水稻對水稻螟蟲的抗性，最終獲得高抗螟蟲的轉(zhuǎn)基因水稻純合植株T1C-19。

2.一種植物表達載體pBar13-cry1C，其特征在于，該載體含有SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列。

3.一個水稻復(fù)合轉(zhuǎn)基因結(jié)構(gòu)，其特征在于：在權(quán)利要求1所述的轉(zhuǎn)基因水稻T1C-19的水稻基因組第11染色體上，所述的復(fù)合轉(zhuǎn)基因結(jié)構(gòu)由以下所示的序列沿5’到3’方向順序連接而成：

(i)SEQ?ID?NO：3所示的插入位點5’端側(cè)翼序列；

(ii)SEQ?ID?NO：4所示的插入的外源基因序列；和

(iii)SEQ?ID?NO：5所示的插入位點3’端側(cè)翼序列。

4.應(yīng)用權(quán)利要求3所述的水稻復(fù)合轉(zhuǎn)基因結(jié)構(gòu)的方法，其特征在于培育一種衍生抗蟲水稻材料，所述衍生水稻材料基因組第11染色體特定位點攜帶有權(quán)利要求1所述的由(i)SEQ?ID?NO：3所示的序列，(ii)SEQ?ID?NO：4所示的插入的外源基因序列，和(iii)SEQ?ID?NO.5所示的序列連接而成的復(fù)合轉(zhuǎn)基因結(jié)構(gòu)。

5.一種側(cè)翼序列，其特征在于：所述側(cè)翼序列是在轉(zhuǎn)基因水稻T1C-19的外源基因中插入一個片段，所述的片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示。

6.一種側(cè)翼序列，其特征在于：所述側(cè)翼序列是在轉(zhuǎn)基因水稻T1C-19的外源基因中插入一個片段，所述的片段的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示。

7.一種轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻5’端側(cè)翼序列的定性PCR檢測方法，其特征在于：PCR反應(yīng)中的引物對的DNA序列如下所示：

Rice-F：TCTTGCTCTTGTGTATGTGAACCC，

pUbi-R：AGAGTTTTAGTTTTCTTAATTTAGAGGCT。

8.一種轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻3’端側(cè)翼序列的定性PCR檢測方法，其特征在于：PCR反應(yīng)中的引物對的DNA序列如下所示：

polyA-Tail-3F：TCTAATTCCTAAAACCAAAATCCAG，

T1c-R：AAATGGGGGATGATGATTGTATG。