[發(fā)明專利]一種將脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)劑及培養(yǎng)基

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310138004.1
• 申請(qǐng)日: 2013-04-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103184190A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高曉惠;趙旭龍;王娟;于麗;陳云燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陳云燕
• 主分類號(hào): C12N5/077
• 分類號(hào): C12N5/077
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于干細(xì)胞誘導(dǎo)分化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脂肪干細(xì)胞定向分化誘導(dǎo)劑及培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

睪酮又稱睪丸素、睪丸酮或睪甾酮，是一種類固醇荷爾蒙，由男性的睪丸間質(zhì)細(xì)胞(Leydig細(xì)胞)或女性的卵巢分泌，腎上腺亦分泌少量睪酮，Leydig細(xì)胞分泌了男性睪酮總量的95％，睪酮在體內(nèi)具有維持肌肉強(qiáng)度及質(zhì)量、維持骨質(zhì)密度及強(qiáng)度、提神及提升體能等作用。人類睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能下降時(shí)，睪酮分泌不足，造成年男性性功能障礙、性欲減退、乏力、容易失眠、記憶力下降等。目前，對(duì)于人類睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能下降，有三種治療方法：1、傳統(tǒng)的雄激素替代療法：存在一些缺點(diǎn)，如服用不便，患者難以長(zhǎng)期堅(jiān)持規(guī)律服用；藥物作用時(shí)間短；血液中雄激素水平波動(dòng)大，尤其是對(duì)于大多數(shù)的青少年病人；肝腎毒性大，被迫中斷的病人多等。2、睪丸移植術(shù)：能在一定程度上能解決男性無(wú)睪癥、小睪丸和性功能障礙等疾病，但睪丸是性器官，是能產(chǎn)生精子的器官，產(chǎn)生倫理學(xué)問(wèn)題。3、睪丸間質(zhì)細(xì)胞移植：雖能避免產(chǎn)生精子，基本上不受倫理學(xué)的限制，但是來(lái)源太少，提取及培養(yǎng)困難，臨床應(yīng)用受限。

隨干細(xì)胞的研究與發(fā)展，人們都把目光轉(zhuǎn)移到了干細(xì)胞上。脂肪干細(xì)胞作為間充質(zhì)干細(xì)胞的一種，是一種多能前體細(xì)胞，在體外可以被誘導(dǎo)向成骨，成軟骨，成脂肪細(xì)胞分化。它不但來(lái)源廣泛，容易取材，而且不存在倫理學(xué)問(wèn)題和免疫排斥反應(yīng)等問(wèn)題。自體干細(xì)胞移植治療睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能下降逐漸被人接受。

但是對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞向睪酮分泌細(xì)胞的分化方法目前研究的并不多，主要方法是：1、通過(guò)轉(zhuǎn)染技術(shù)向細(xì)胞內(nèi)引入固醇生成因子1(SF-1)或肝臟受體類似物1(LRH-1)并輔以RA來(lái)誘導(dǎo)MSC分泌睪酮。SF-1在睪酮分泌中起到重要的調(diào)控作用，但是SF-1為孤兒核受體家族成員，其調(diào)控轉(zhuǎn)錄元件位于細(xì)胞核中，在調(diào)控過(guò)程中是以單體的形式結(jié)合于DNA上，屬于胞內(nèi)調(diào)控元件。2、間充質(zhì)干細(xì)胞與Leydig細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)為睪酮分泌細(xì)胞，Leydig細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中可以分泌多種因子及激素，整個(gè)誘導(dǎo)過(guò)程十分復(fù)雜，目前還無(wú)法確切得知誘導(dǎo)過(guò)程中涉及的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。3、MSC注射到大鼠睪丸內(nèi)，并對(duì)大鼠持續(xù)灌胃給藥，淫羊藿苷可以誘導(dǎo)睪丸內(nèi)的MSC向Leydig細(xì)胞分化，并分泌睪酮。淫羊藿苷是從淫羊藿的干燥莖葉中提取的有效成分，作為一種黃酮類化合物，具有增加心腦血管血流量、促進(jìn)造血功能、免疫功能及骨代謝，還具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)、抗衰老等功效。研究發(fā)現(xiàn)雄性小鼠灌胃淫羊藿水煎液可升高血漿睪丸酮的含量，增加睪丸和提肛肌的重量。4、有研究者發(fā)現(xiàn)只用RA就可以誘導(dǎo)MSC分泌睪酮和雌二醇，但是文獻(xiàn)中的實(shí)驗(yàn)組分泌量和對(duì)照組沒(méi)有明顯差異。在體內(nèi)，Leydig細(xì)胞在人絨毛促性腺激素(HCG)的脈沖刺激下分泌睪酮，但是對(duì)體外培養(yǎng)的Leydig細(xì)胞加以刺激時(shí)50IU/ml的效果最好。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種將脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)劑，該誘導(dǎo)劑能夠?qū)⒅靖杉?xì)胞定向誘導(dǎo)分化為睪酮分泌細(xì)胞。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種將脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)劑，含有淫羊藿苷、維甲酸、人絨毛膜促性腺激素。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種將脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基通過(guò)以下方法制備：以人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基為基質(zhì)，每1000ml所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中含有：淫羊藿苷0.5～10μmol、維甲酸l～10μmol、人絨毛膜促性腺激素2～8萬(wàn)單位，余量為人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，混勻過(guò)濾除菌即可。

本發(fā)明提供的將脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)劑及培養(yǎng)基，具有如下優(yōu)點(diǎn)：1、無(wú)需細(xì)胞轉(zhuǎn)染，故無(wú)基因改變及罹患癌癥風(fēng)險(xiǎn)；2、誘導(dǎo)分化效率高；3、發(fā)揚(yáng)中醫(yī)中藥的特色，可誘導(dǎo)自體脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞，該睪酮分泌細(xì)胞移植后無(wú)排斥，無(wú)倫理問(wèn)題，安全性高。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法。實(shí)驗(yàn)所用器具儀器試劑皆可通過(guò)商業(yè)途徑獲得。

實(shí)施例1一種將脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)劑，含有淫羊藿苷、維甲酸、人絨毛膜促性腺激素。

實(shí)施例2本實(shí)施例的將脂肪干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為睪酮分泌細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將下列原料按其各自特性進(jìn)行溶解，以人間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基為基質(zhì)(LONZA，00190632)，使各組分含量如下列定容至1000ml：維甲酸(RA，Sigma，R2625-50MG)2μmol；淫羊藿苷(上海微晶生物，489-32-7，20mg)1μmol；HCG(Sigma，CG5-10VL)5萬(wàn)單位。