[發(fā)明專利]同時檢測三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物傳感器的制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310136721.0
• 申請日: 2013-04-19
• 公開（公告）號: CN103235021B
• 公開（公告）日: 2013-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏琴;杜斌;吳丹;張勇;崔振濤;馬洪敏;李賀;于海琴
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種傳感器的制備方法，所述傳感器用于三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的同時檢測，其特征在于，步驟如下：

（1）在三通道絲網(wǎng)印刷電極的3個工作電極的表面，分別滴加5~10?μL、濃度為2?mg/mL的石墨烯溶液，室溫下自然晾干；

（2）在（1）中得到的3個工作電極的表面上分別滴加5~10μL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺/N-羥基琥珀酰亞胺EDC/NHS溶液，保持濕潤、孵化2~3?h，超純水清洗，晾干；

所述EDC和NHS的濃度均為1mg/mL，EDC和NHS的質(zhì)量比為1~8?:?1；

（3）在（2）中得到的3個工作電極的表面上分別滴加5~10?μL三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的一抗溶液中的一種，室溫下放置1~2?h，然后4°C下過夜孵化；

所述三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的一抗溶液的濃度為5~10μg/mL；

（4）用超純水洗去沒有交聯(lián)上的所述的乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的一抗，再滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%~1%的牛血清白蛋白溶液，在37°C下放置1?h，用pH=7.0~7.8的PBS緩沖溶液洗滌晾干，在4°C下儲存?zhèn)溆茫?

（5）把已知濃度的三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的抗原溶液加入到40~60μL、pH=7.0~7.8的PBS緩沖溶液中，各取10~15μL分別滴涂到三個工作電極上，放置1?h；

（6）分別滴涂5~7μL?介孔鉑納米粒子標(biāo)記的三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的二抗標(biāo)記物M-PtNPs/Ab2溶液到相應(yīng)的工作電極上，1h后用pH=7.0~7.8的PBS緩沖溶液洗去未結(jié)合上的標(biāo)記物，得到組裝的工作電極；

所述介孔鉑納米粒子M-PtNPs，制備步驟如下：

向6~10mL、20?mmol/L的K₂PtCl₄溶液中，加入聚氧乙烯醚Brij58使其濃度為8.95?~?10.95?mmol/L，然后加入6?~?10?mL、0.1?mmol/L的抗壞血酸溶液，把混合溶液超聲10?~?15?min，溶液由慢慢地變渾濁，顏色由黃褐色變成棕褐色，最后變成不透明的黑色后，再高速旋轉(zhuǎn)35?~?45?min，離心分離，用超純水洗滌數(shù)次，然后真空干燥，即得到M-PtNPs；

所述M-PtNPs?/Ab2溶液，制備步驟如下：

將0.5?~1.5mg的介孔鉑納米粒子加入1mL、?pH=7.0~7.8的PBS緩沖溶液，超聲分散后，加入10μg?三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的二抗Ab2溶液中的一種，混合溶液在4°C下震蕩孵化20~24h，離心分離去除上清液，然后再加入1mL?pH=7.0~7.8的PBS緩沖溶液，得到三種M-PtNPs/Ab2溶液，儲存在4°C的冰箱中備用；

所述三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的二抗溶液的濃度為5~10μg/mL；

（7）將參比電極、對電極和工作電極連接在電化學(xué)工作站上，在電解槽中加入40~60?μL、5~10?mmol/L?H₂O₂的pH=7.0~7.8的PBS緩沖溶液，然后用差分脈沖伏安法檢測組裝的工作電極的電流響應(yīng)，根據(jù)所得電流響應(yīng)與三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的抗原標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度之間的關(guān)系，繪制工作曲線；

（8）將待測樣品溶液代替三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物抗原的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照所述三種乳腺癌腫瘤標(biāo)志物的抗原的工作曲線的繪制方法進(jìn)行檢測。

2.如權(quán)利要求1所述的傳感器的制備方法，其特征在于，所述的三乳腺癌腫瘤標(biāo)志物選自：癌胚抗原（CEA）、?糖類抗原125（CA125）和糖類抗原15-3（CA15-3）。