[發(fā)明專利]一種對(duì)薄膜樣品室內(nèi)低值目標(biāo)分析物量化的生物流體樣品進(jìn)行免疫測(cè)定的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310135006.5
• 申請(qǐng)日: 2013-04-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103175820A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐云鵬;燕春暉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 徐云鵬
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;G01N33/533
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種運(yùn)用成像系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)和量化低濃度目標(biāo)分析物的方法和裝置，具體的說(shuō)是一種對(duì)薄膜樣品室內(nèi)低值目標(biāo)分析物量化的生物流體樣品進(jìn)行免疫測(cè)定的方法。

背景技術(shù)

眾所周知諸如荷爾蒙的某些分析物，如TSH（促甲狀腺激素），其濃度可能低至成千上萬(wàn)分子/微升，針對(duì)這種極低濃度的分析物即可采用本發(fā)明所述裝置來(lái)測(cè)量分析物的單個(gè)分子量。本發(fā)明的一大優(yōu)勢(shì)是它是一種主要的量化方法，因而無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在檢測(cè)和量化某特定目標(biāo)分析物，如2微米~10微米厚平面室所含的薄膜生物流體樣本內(nèi)的分析物，目標(biāo)分析物至少含有兩種抗原，可將特定目標(biāo)分析物的單個(gè)分子與固定基質(zhì)粘結(jié)，盡管本發(fā)明所涉及到的粘結(jié)劑可針對(duì)一種以上的抗原有效。基質(zhì)中含有捕獲抗體或綁定配體。抗體或配體主要針對(duì)目標(biāo)分析物的第一抗原或所有抗原，并且可固定分析物，以防止擴(kuò)散。可將目標(biāo)分析物與基質(zhì)粘結(jié)，然后利用標(biāo)記探針對(duì)綁定的目標(biāo)分析物進(jìn)行檢測(cè)。探針包含與表面粘結(jié)的多種抗體或配體，可針對(duì)目標(biāo)分析物的第二抗原表位或抗原。

第一和第二抗原位于目標(biāo)分析物上，其位置必需確保各類抗原的粘結(jié)不會(huì)防止其它類抗原的粘結(jié)。“抗體”和“配體”這兩個(gè)術(shù)語(yǔ)指任何能夠與目標(biāo)抗原有效粘結(jié)的物質(zhì)，包括免疫球蛋白、反映體及類似具有高黏結(jié)力的一切生物粘結(jié)劑。

本發(fā)明適用于檢測(cè)和識(shí)別任何含有兩種以上抗原的目標(biāo)分析物，如TSH（促甲狀腺激素）。將一種生物流體樣本樣品—最好是血漿或血清—放入一個(gè)反應(yīng)室內(nèi)，反應(yīng)室的表面尺寸應(yīng)可允許對(duì)分析物的分子數(shù)量進(jìn)行最大計(jì)數(shù)，具體如下所述。

反應(yīng)室底面或頂面由塑料薄膜制成，甲促腺抗體（以超過(guò)所需的數(shù)量）粘附在表面上，以最大量地捕捉目標(biāo)分析物。捕獲抗體必需不可逆轉(zhuǎn)地綁定在固定基質(zhì)上，確保在分析過(guò)程中抗體不會(huì)離開(kāi)粘結(jié)表面，該區(qū)域稱為捕獲區(qū)。

將血漿或血清樣本添加到反應(yīng)室內(nèi)，樣本中所有的甲促腺分子與含有捕獲抗體的固定基質(zhì)粘結(jié)，從而固定住樣本中的所有分子。薄壁厚度（通常小于10微米）允許分子以最快的速度垂直擴(kuò)散，進(jìn)而確保透過(guò)薄壁兩層進(jìn)行快速擴(kuò)散，從而使得分析物的所有分子與到捕獲抗體表面接觸。理想情況下，等離子體或其他被檢查的生物流體不應(yīng)含有諸如細(xì)胞的粒子，防止對(duì)分析物粘結(jié)造成干擾或影響到分析信號(hào)的檢測(cè)。

同時(shí)或經(jīng)過(guò)短暫的初始保溫期后，將與抗體粘結(jié)的熒光納米粒子（如抗β甲促腺抗體）加入到樣品中（以超過(guò)所需的數(shù)量），確保對(duì)粘結(jié)分子進(jìn)行最大量地計(jì)數(shù)。納米粒子的直徑最好為10-100納米，由銪熒光材料或任何可檢測(cè)的納米粒子組成，例如量子點(diǎn)或其他納米顆粒。這些熒光納米粒子必需足夠小，且濃度大小達(dá)到膠態(tài)懸浮狀，除非其表面粘結(jié)的抗體與固定分析物粘結(jié)在一起。

將含有針對(duì)甲促腺分析物的抗體/腺體的單個(gè)熒光納米粒子與粘結(jié)到基質(zhì)上的甲促腺分子粘結(jié)。未與固定分析物粘結(jié)的熒光納米顆粒將繼續(xù)處于膠態(tài)懸浮狀，同時(shí)進(jìn)行布朗運(yùn)動(dòng)。為了區(qū)分束縛和未束縛的納米粒子，經(jīng)培植一段時(shí)間后（固定發(fā)光納米粒子發(fā)光時(shí)，信號(hào)大量增加；而移動(dòng)納米粒子發(fā)光時(shí)，會(huì)由于未束縛的信號(hào)產(chǎn)生納米粒子而導(dǎo)致背景光的存在）。曝光時(shí)間根據(jù)測(cè)量?jī)x器進(jìn)行測(cè)定，但應(yīng)最大程度的加以限制，因?yàn)檫@些區(qū)域可能沒(méi)有束縛性納米粒子的存在。將固定在基質(zhì)上且必須停留在一個(gè)區(qū)域內(nèi)的納米粒子的光子投射到若干像素內(nèi)；相對(duì)而言，進(jìn)行布朗運(yùn)動(dòng)的納米粒子的光度分布范圍大得多，從而使得固定粒子的檢測(cè)變得更容易。不含捕獲抗體的反應(yīng)室表面可作為控制區(qū)之用。