[發(fā)明專利]一種魚類炎癥性腸病模型建立方法及其建立的模型

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310134518.X
• 申請(qǐng)日: 2013-04-17
• 公開（公告）號(hào): CN103301162A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋學(xué)宏;趙杰;孫丙耀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K35/74
• 分類號(hào): A61K35/74
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 常亮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種魚類炎癥性腸病模型建立方法及其建立的模型。?

背景技術(shù)

魚類為我國(guó)消費(fèi)者輸送了大量的動(dòng)物性蛋白營(yíng)養(yǎng)，但養(yǎng)殖過(guò)程中炎癥性腸病的發(fā)生頻率極高，通常魚類細(xì)菌性腸炎與赤皮病、爛鰓病、腸道六鞭毛蟲病、腸袋蟲病、病毒性出血病、肝膽綜合癥等疾病并發(fā)，嚴(yán)重影響其的成活率與養(yǎng)殖生產(chǎn)性能，阻礙魚類養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。發(fā)生魚類腸炎的機(jī)制目前尚不明確，因此研究魚類炎癥性腸病（IBD）的發(fā)病主要原因、發(fā)病癥狀、病理機(jī)制具有重要的理論意義與巨大的實(shí)用意義；以期能夠針對(duì)病因在魚類未感染炎癥性腸病前采取有效的防治措施維護(hù)魚類腸道的健康，少用藥物，發(fā)揮魚類的最大生長(zhǎng)潛能，生產(chǎn)出安全的魚產(chǎn)品。近年來(lái)，醫(yī)學(xué)界對(duì)IBD病因及發(fā)病機(jī)制的研究十分活躍，而動(dòng)物腸炎模型的制作為研究該病的發(fā)病機(jī)理及藥物篩選提供了載體。?

目前，人們通過(guò)乙酸、三硝基苯磺酸（TNBS）、惡唑酮、角叉菜膠、硫酸多糖等化學(xué)藥物誘導(dǎo)建立IBD模型，也用基因敲除和轉(zhuǎn)基因技術(shù)誘導(dǎo)建立炎癥性腸病模型。至于水生動(dòng)物魚類炎癥性腸病模型的研制，已有用炎癥因子IL-16誘導(dǎo)黑青斑河豚腸炎的報(bào)道，但這種模型的誘導(dǎo)物專一性強(qiáng)，模型在其他魚類上通用性不強(qiáng)。同時(shí)，與醫(yī)學(xué)炎癥性腸病相比，水生動(dòng)物的生存環(huán)境復(fù)雜，受水體溶氧、氨氮等理化因子、病原微生物等因子的影響大于陸生動(dòng)物，因此對(duì)水生動(dòng)物炎癥性腸病模型的研究相對(duì)較困難，現(xiàn)只是起步階段。?

早在1958年，王德銘等從患腸炎病草魚中分離到一種腸型點(diǎn)狀產(chǎn)氣單胞菌(Aeromonas?punctata?f.intestinalis)（王德銘，1959），與嗜水氣單胞菌（Aeromonas?hydrophila）同物異名（徐伯亥，1987）。此菌在正常魚體腸道中是一常居者，在天然水體和底泥中大量存在，與魚的接觸機(jī)會(huì)很多。當(dāng)魚在良好的水環(huán)境條件下，雖然感染但不發(fā)病。在復(fù)雜的惡劣條件下，嗜水氣單胞菌會(huì)導(dǎo)致流行病的暴發(fā)（如與病毒性出血病并發(fā)），這是由于病毒促使宿?主機(jī)體發(fā)生改變，導(dǎo)致魚體抵抗力下降，防御功能降低，因而使細(xì)菌容易侵入血液和腸道中，并大量繁殖造成腸炎或全身出血炎癥。但是，發(fā)生魚類腸炎的機(jī)制尚不明確。以后的研究發(fā)現(xiàn)，嗜水氣單胞菌感染譜廣泛，幾乎所有水生動(dòng)物都能被感染。徐伯亥等研究發(fā)現(xiàn)，該菌通過(guò)對(duì)健康草魚的腹腔注射感染，獲得陽(yáng)性結(jié)果，而浸泡或口服均不能使健康草魚感染。從1964年起，徐伯亥等繼又研究了十年卻始終沒(méi)有分離到口喂成功的致病細(xì)菌（徐伯亥，1987）。?

嗜水氣單胞菌無(wú)法通過(guò)口服或浸泡使健康魚類染病，而必須采用腹腔注射或肌肉注射，但是，腹腔注射或肌肉注射會(huì)對(duì)魚體造成機(jī)械損傷，并且采用腹腔注射或肌肉的方式會(huì)使致病菌或進(jìn)入血液，伴隨血液循環(huán)導(dǎo)致魚體全身發(fā)病，構(gòu)建出的炎癥性腸病模型不具有針對(duì)性，對(duì)后續(xù)研究造成了不利影響。目前尚未見可通過(guò)口服、浸泡或肛門灌注等非機(jī)械損傷即可致炎的方法。?

發(fā)明內(nèi)容

為了研究魚類炎癥性腸病的發(fā)病原因、病理機(jī)制、防控方法，本發(fā)明提供一種簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好的魚類炎癥性腸病模型，并使其表現(xiàn)為類似魚類炎癥性腸病的特征，為魚類的炎癥性腸病病因、病理機(jī)制、防治方法的制定提供研究載體。?

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：?

本發(fā)明提供了一種魚類炎癥性腸病模型建立方法，包括以下步驟：?

通過(guò)肛門灌注將保藏編號(hào)為CCTCC?NO.M2013089的嗜水氣單胞菌注入經(jīng)浸泡麻醉的健康魚體內(nèi)，養(yǎng)殖并選擇表現(xiàn)出炎癥性腸病癥狀的魚作為魚類炎癥性腸病模型。?

本發(fā)明采用的嗜水氣單胞菌，菌種名稱為嗜水氣單胞菌SDS-1，從草魚細(xì)菌性腸炎的肝胰腺、腎臟、腸道分離獲得，屬于氣單胞菌屬嗜水氣單胞菌（Aeromonas?hydrophila）。?

本發(fā)明所述嗜水氣單胞菌SDS-1菌株已于2013年3月18日在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）進(jìn)行保藏，保藏中心地址為湖北省武漢市武漢大學(xué)校內(nèi)，保藏編號(hào)為CCTCC?NO.M2013089。?

作為優(yōu)選，保藏編號(hào)為CCTCC?NO.M2013089的嗜水氣單胞菌的濃度為?10⁵CFU/mL～10⁸CFU/mL。?

作為優(yōu)選，用于構(gòu)建魚類炎癥性腸病模型的魚的體重為20g～100g。?

作為優(yōu)選，肛門灌注的灌注量為0.25mL/尾～0.50mL/尾。?

作為優(yōu)選，用于構(gòu)建魚類炎癥性腸病模型的魚為草魚或鯽魚?