[發明專利]大白菜抗根腫病CRb基因的連鎖分子標記、引物及抗根腫病植株的選擇方法

有效

• 申請號: 201310132230.9
• 申請日: 2013-04-16
• 公開（公告）號: CN103275972A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 樸鐘云;張騰;趙卓;陳慧慧;陳靜靜;張椿雨;李宏博;李海燕;李艷輝
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 沈陽科威專利代理有限責任公司 21101
• 代理人: 張述學

技術領域

本發明涉及與大白菜抗根腫病基因CRb緊密連鎖的分子標記、引物序列以及篩選大白菜抗根腫病植株的方法。

背景技術

2002年，本課題組獲得了1份抗蕓薹根腫病的大白菜雙單倍體系‘CR?Shinki?DH’系，研究表明該抗病材料抗蕓薹根腫菌生理小種2、4和8（Piao等，Conversion?of?AFLP?marker?linked?to?clubroot?resistance?gene?into?SCAR?marker.?2002，J?Kor?Soc?Hort?Sci?43:653–665）。進一步研究證明抗根腫病基因為顯性單基因，并命名為CRb?（Piao等，SCAR?and?CAPS?mapping?of?CRb,?a?gene?conferring?resistance?to?Plasmodiophora?brassicae?in?Chinese?cabbage?（Brassica?rapa?ssp.?pekinensis），Theor?Appl?Genet，2004，108:1458-1465）。

在蕓薹種抗根腫病品種轉育過程中，每代都需要采用田間接種根腫病菌的方法鑒定中間材料的基因型，而且環境條件會影響到正確中間材料的選擇，這樣勢必影響轉育進程，因此抗病品種轉育難的問題還沒有徹底解決。分子標記輔助選擇技術（MAS）可能是最終解決這一問題的有效途徑。

目前，只有國內沈陽農業大學樸鐘云等（2004）獲得了與蕓薹種抗根腫病基因CRb連鎖的CAPS標記。其中最近的兩個側翼標記TCR05和TCR09，見（Piao等，SCAR?and?CAPS?mapping?of?CRb,?a?gene?conferring?resistance?to?Plasmodiophora?brassicae?in?Chinese?cabbage（Brassica?rapa?ssp.?pekinensis），Theor?Appl?Genet，108:1458-1465），但這些標記與CRb的遺傳距離較遠。因此，本實驗在這兩個CAPS標記基礎上，開發與大白菜抗根腫病基因CRb緊密連鎖的標記，精細定位該基因，從而簡化大白菜抗根腫病品種的轉育程序。

發明內容

發明目的是：

（1）提供與大白菜抗根腫病基因CRb緊密連鎖的分子標記；

（2）提供由所述標記的全長序列和PCR引物序列；

（3）提供在對大白菜抗根腫病基因進行輔助選擇的過程中對上述標記進行應用的方法。

（4）通過特異引物PCR擴增可對待測植株進行苗期鑒定，大大提高育種效率，縮短了育種進程。

本發明提供的技術方案如下：

1．與大白菜抗根腫病CRb基因緊密連鎖的分子標記：TCR25、TCR108、TCR116、TCR30、TCR74分別具有如下核苷酸序列：

（1）TCR25（301bp）：

5’-CGTTTAAATTTGTTTATACGATGCAAATTCACTAGTTTATATGATATATATGTATACTATATATATATTTGATATATATATATATATATATATATATTTGGATTGTAACCACCTCGAATTTTGAGATAATTATCATGTGAAAACGAAGACAAAAAAAAATTATGGGCATATTGATTGTATCTAATAAATTAATCATCCGATTAGTATATTCAAAATTAAAAAAAATCTTTATATTTTAAGAGAAATAGTGATAATGTCAAATATAACACACAAAAAAAATTCATATTCTGTTAATGGGACA-3’

（2）TCR108（1366bp）: